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猪链球菌2型不同温度条件下分泌蛋白的差异研究

作　者: 谢春艳
导　师: 金梅林
学　校: 华中农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪链球菌2型分泌蛋白质组学 LC/ESI-MS/MS 实时荧光定量PCR
分类号: S852.61
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

猪链球菌（Streptococcus suis）是一种重要的猪病病原体,能引起猪疫病,临床上能引起猪的高热、脑膜炎、败血症、关节炎、神经症状等。该菌有35个血清型,其中2型流行最广、且致病性最强,并能感染人,是一种重要的人畜共患病病原。目前对SS2研究较多,但其在宿主体内如何生存、繁殖并成功侵染宿主的机制还不清楚。本研究的目的就是欲通过蛋白质组学和实时荧光定量PCR两项主要技术,寻找新的毒力相关蛋白,进一步阐明SS2的发病机理。本实验以SS2的四川分离株SC-21为实验材料,建立了其在37℃常温下对数生长早期的分泌蛋白图谱,通过双向电泳技术研究了SC-21在高温条件下的分泌蛋白,并应用Image Master^TM 2D Platinum软件分析其分别在37℃（对照条件）和42℃（模拟发病猪的体温）培养条件下的分泌蛋白图谱的差异。在42℃的蛋白谱上共找到5个相对37℃表达明显上调的点,将差异蛋白点经过酶解及液相色谱—电喷雾—串联质谱（LC/ESI-MS/MS）进行鉴定分析,这五个差异蛋白分别为:核酸酶SsnA、肽聚糖水解酶CHAP、ABC转运蛋白—谷氨酸盐底物结合蛋白、假设蛋白SSU05-2101和一个未知蛋白。为了探讨差异蛋白的基因表达水平情况,我们以其中两个比较有意义的蛋白:分泌性核酸酶SsnA和肽聚糖水解酶CHAP的基因为研究对象,通过实时荧光定量PCR方法检测其在高温诱导后宿主体外和体内的mRNA水平的变化。实验结果显示,SC-21体外42℃温度诱导培养时,SsnA和的转录水平均高于对照组;体内检测发现,两个基因在急性感染SC-21的发病猪的脑、肺、脾和血液中的mRNA水平相对于健康对照猪均为上调表达,但不同组织的上调表达程度不同:SsnA基因在脑中上调表达最明显,而CHAP基因在肺中的上调表达最明显。本研究结果表明SC-21在高温的疾病状态下其部分泌蛋白的表达有一定的变化,对差异表达蛋白进行进一步的研究将有助于深入了解猪链球菌2型的致病机理,为猪链球菌病的预防和治疗提供科学的依据。

猪链球菌2型不同温度条件下分泌蛋白的差异研究

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