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奶粉中奇异变形杆菌检测方法的研究

作　者: 罗兆飞
导　师: 张为宇
学　校: 广西大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 奶粉奇异变形杆菌 PCR
分类号: TS252.51
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的：研究建立奶粉中奇异变形杆菌的常规检测方法、PCR检测方法，并对鲜奶和市售的奶粉中奇异变形杆菌的污染情况进行调查，获取风险评估的基础数据。方法和结果：第一，利用奇异变形杆菌对选择性增菌培养基、选择性分离培养基进行筛选，最后根据其生化反应特征，建立常规检测方法程序。第二，根据奇异变形杆菌抗亚碲酸盐基因的保守序列设计引物Q248，选择合适的反应体系和条件，研究PCR方法的特异性和敏感度，并进行了扩增产物的测序。结果显示，该PCR方法具有良好特异性，与普通变形杆菌以及其他肠杆菌科细菌无非特异性扩增，对人工布菌的奶粉样品检测敏感度达1．7×10~2cfu／100g。第三，利用建立的奇异变形杆菌检测方法，对161份市售奶粉和55份鲜奶进行奇异变形杆菌检测，结果奶粉中未检出奇异变形杆菌，而有4份鲜奶检出奇异变形杆菌。调查结果表明原料奶容易受到奇异变形杆菌的污染，而奶粉中未检出，说明目前奶粉的生产工艺对奇异变形杆菌能予以很好的控制。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-10
前言  10-12
第一章文献综述  12-28
  1.1 奇异变形杆菌简介  12-15
    1.1.1 病原学特征  12-13
    1.1.2 流行病学  13-14
    1.1.3 致病机理  14-15
  1.2 细菌检测鉴定方法的研究进展  15-24
    1.2.1 微生物检验的发展历史  15-17
    1.2.2 病原细菌的检测方法研究进展  17-24
  1.3 奇异变形杆菌检测方法的研究现状  24-26
  1.4 研究的目的和意义  26-28
第二章奶粉中奇异变形杆菌常规检测方法的研究  28-34
  2.1 材料与方法  28-30
    2.1.1 材料  28
    2.1.2 方法  28-30
      2.1.2.1 菌种的确认  28-29
      2.1.2.2 选择性增菌培养基的确定  29
      2.1.2.3 选择性分离培养基的确定  29
      2.1.2.4 快速初筛生化反应培养基的确定  29
      2.1.2.5 奇异变形杆菌的最终鉴定  29-30
      2.1.2.6 模拟污染样品的检测  30
      2.1.2.7 鲜乳样品的检测  30
  2.2 结果与分析  30-31
    2.2.1 菌种确认结果  30-31
    2.2.2 三种增菌培养基效能的实验观察结果  31
    2.2.3 四种肠道菌分离培养基效能的实验观察结果  31
    2.2.4 模拟污染样品的检测结果  31
    2.2.5 鲜乳样品的检测结果  31
  2.3 结论与讨论  31-34
    2.3.1 确定GN增菌液为变形杆菌的选择性增菌培养基  31-32
    2.3.2 确定SS琼脂为奇异变形杆菌的分离培养基  32
    2.3.3 确定三项快速筛选生化反应指标  32-33
    2.3.4 确立的奶粉中变形杆菌的常规检测方法检验程序  33-34
第三章奶粉中奇异变形杆菌PCR检测方法的研究  34-41
  3.1 材料与方法  34-36
    3.1.1 材料  34-35
      3.1.1.1 供试菌种  34
      3.1.1.2 培养基及试剂  34
      3.1.1.3 实验仪器  34-35
    3.1.2 方法  35-36
      3.1.2.1 试验菌的培养  35
      3.1.2.2 目标菌的分离与培养  35
      3.1.2.3 奇异变形杆菌计数  35
      3.1.2.4 细菌DNA的制备  35
      3.1.2.5 奇异变形杆菌PCR检测引物的设计  35
      3.1.2.6 PCR反应体系和条件  35-36
      3.1.2.7 PCR特异性试验  36
      3.1.2.8 PCR方法对人工布菌样品的检测敏感度试验  36
      3.1.2.9 扩增产物的检测  36
      3.1.2.10 扩增产物的确证  36
      3.1.2.11 PCR方法的对鲜奶样品的检测  36
  3.2 结果与分析  36-40
    3.2.1 PCR的特异性分析  36-37
    3.2.2 PCR的灵敏度试验结果  37
    3.2.3 PCR特异性扩增产物序列测定结果  37-38
    3.2.4 PCR特异性扩增产物序列的同源比较  38-39
    3.2.5 PCR方法对鲜奶样品的检测结果  39-40
  3.3 结论与讨论  40-41
第四章奶粉中奇异变形杆菌检测方法的应用  41-49
  4.1 材料和方法  41-42
    4.1.1 试样  41-42
    4.1.2 主要试剂和仪器  42
    4.1.3 方法  42
  4.2 结果与讨论  42-49
第五章结论与讨论  49-50
  5.1 结论  49
  5.2 讨论  49-50
参考文献  50-56
致谢  56-57
攻读学位期间发表论文情况  57-58

奶粉中奇异变形杆菌检测方法的研究

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