学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

云南热泉可培养高温厌氧菌多样性研究

作　者: 陆月情
导　师: 林连兵
学　校: 昆明理工大学
专　业: 微生物学
关键词: 云南热泉可培养高温厌氧菌多样性分类鉴定
分类号: Q938.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 46次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

嗜热厌氧菌包括最佳生长温度在50℃以上的细菌或古菌,其生长不需要氧作为电子受体。对嗜热厌氧菌的研究有助于了解生命在极端地球环境下生存的机制,高温厌氧菌也是高温酶应用开发的重要菌株资源。本论文对云南腾冲热海、龙陵巴腊掌、大理洱源的中性(pH 6.5-7.5)高温热泉(70-94℃)可培养高温厌氧菌多样性进行研究。利用Hungate及斜面厌氧分离技术从以上10个热泉中分离出50株高温厌氧菌,选取其中30株进行了16S rRNA基因系统发育分析,确定了其分类学地位。其中28个菌株分别属于Caldanaerobacter属,Calaramator属,Thermoanaerobacter属,Dictyoglomus属和Fervidobacterium属,在进化树上构成了五个分支,以Caldanaerobacter属菌株最最多。另外2个菌株为Methanothermobacter属的嗜热甲烷杆菌古菌菌株。这些菌株大多为已知的高温厌氧菌,然而其中有7个菌株与已知的高温厌氧菌16S rDNA序列同源性最高介于93%-97%之间,论文进一步对这7个菌株进行了形态特征、生理生化特性、G+Cmol%测定、代谢产物分析等研究,结果表明,这7个菌株均具有形成新种的可能。本论文首次初步研究了云南热泉可培养高温厌氧菌的多样性,获得一批高温厌氧菌株,丰富了我国的高温厌氧菌资源,为进一步探索其多样性特征、地理分布规律及高温酶的应用开发奠定了扎实的基础。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-10
插图和附表清单  10-14
第一章前言  14-27
  1.1 极端微生物概述  14-16
  1.2 高温菌概述  16-17
  1.3 高温厌氧菌  17-22
    1.3.1 高温厌氧菌的生态环境  17-18
    1.3.2 高温厌氧菌酶的特性  18
    1.3.3 高温厌氧菌耐热机理的探索  18-20
    1.3.4 高温厌氧菌的应用  20-22
  1.4 热环境微生物多样性的分子生态学研究方法  22-25
    1.4.1 PCR扩增技术  22
    1.4.2 16S rRNA序列同源性分析  22-23
    1.4.3 末端限制性片段长度多态性分析(Terminal RestrictionFragment Length Polymorphism,T-RFLP)  23
    1.4.4 实时定量PCR技术(Real-time PCR,Quantitative PCR,qPCR)  23-24
    1.4.5 变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE)  24
    1.4.6 荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)  24-25
  1.5 国内外高温厌氧环境微生物多样性的研究现状  25-26
    1.5.1 国内研究现状  25
    1.5.2 国外研究现状  25-26
  1.6 研究的目的和意义  26-27
第二章云南热泉高温厌氧菌株的分离和保藏  27-42
  2.1 材料  27-30
    2.1.1 样品采集  27
    2.1.2 厌氧培养基的类型  27-30
  2.2 方法  30-34
    2.2.1 高温厌氧样品的富集培养  30
    2.2.2 高温厌氧菌的分离纯化  30-32
    2.2.3 菌体纯度检查  32
    2.2.4 菌体形态观察  32-33
    2.2.5 菌种保藏  33-34
  2.3 结果  34-41
    2.3.1 云南热泉高温厌氧样品采集  34
    2.3.2 云南热泉高温厌氧样品富集培养  34-35
    2.3.3 云南热泉高温厌氧菌分离纯化  35
    2.3.4 纯化菌株细胞形态  35-41
    2.3.5 菌株的保藏  41
  2.4 讨论  41-42
第三章菌株16S rRNA基因序列分析及多样性的初步研究  42-68
  3.1 材料  42-43
    3.1.1 菌种  42
    3.1.2 质粒  42-43
    3.1.3 培养基  43
  3.2 方法  43-47
    3.2.1 感受态细胞的制备  43
    3.2.2 小量制备DNA  43-44
    3.2.3 PCR扩增16S rDNA  44-45
    3.2.4 连接反应  45-46
    3.2.5 转化反应  46
    3.2.6 阳性克隆的筛选  46-47
    3.2.7 16S rRNA基因序列提交  47
    3.2.8 系统发育树的构建  47
  3.3 结果  47-66
    3.3.1 16SrRNA基因PCR扩增结果  47-48
    3.3.2 PCR产物的克隆及转化产物的检测  48
    3.3.3 序列提交  48-50
    3.3.4 系统发育树的构建  50-66
  3.4 讨论  66-68
第四章部分高温厌氧菌株的鉴定  68-128
  4.1 材料  68-69
    4.1.1 菌株  68-69
    4.1.2 培养基  69
  4.2 方法  69-72
    4.2.1 细胞形态观察  69
    4.2.2 菌株生长温度范围的测定  69
    4.2.3 菌株生长pH值范围的测定  69-70
    4.2.4 菌株耐盐度的测定  70
    4.2.5 抗生素耐性测定  70
    4.2.6 唯一碳源利用测定  70
    4.2.7 DNA的G+C含量测定  70-72
    4.2.8 代谢产物测定  72
    4.2.9 16S rRNA基因序列系统发育树的构建  72
  4.3 结果  72-126
    4.3.1 菌株RH0804的鉴定描述  72-80
    4.3.2 菌株RH0806的鉴定描述  80-87
    4.3.3 菌株TC12的鉴定描述  87-95
    4.3.4 菌株TC25的鉴定描述  95-101
    4.3.5 菌株TC36的鉴定描述  101-109
    4.3.6 菌株TC47的鉴定描述  109-116
    4.3.7 菌株TC38的鉴定描述  116-123
    4.3.8 本文所分离高温厌氧菌株所在各属的描述  123-126
  4.4 讨论  126-128
第五章总结  128-130
致谢  130-131
参考文献  131-137
附录A 攻读硕士期间发表论文目录  137
附录B 试验常用试剂及其配制  137-140

云南热泉可培养高温厌氧菌多样性研究

内容摘要

全文目录

相似论文