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腱组织提取物对大鼠脂肪来源间充质干细胞增殖和向肌腱细胞分化的影响

作　者: 刘刘
导　师: 倪江东
学　校: 中南大学
专　业: 外科学
关键词: 腱组织提取物 脂肪来源间充质干细胞 增殖 分化
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


研究目的探讨腱组织提取物对ADSC增殖和向肌腱细胞方向分化的影响,从而为肌腱组织工程及其最终应用于临床提供理论依据。研究方法从3周龄SD大鼠腹股沟脂肪垫分离出脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化法分离干细胞,接种于含有胎牛血清的DMEM培养基中分离传代。每日以倒置显微镜观察细胞形态及生长情况,MTT法绘制ADSC生长曲线。经鉴定后,取第三代ADSC分成实验组和对照组2组,利用腱组织提取物处理实验组ADSC, Hank’s液处理对照组细胞后继续培养观察。采用MTT比色法进行增殖活性比较,Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色检测成肌腱分化情况以及RT-PCR检测肌腱发育相关基因(CollagenⅠ、CollagenⅢ基因)的表达。研究结果原代细胞接种4-6小时后即可见沉降贴壁,7-8天左右可见大量增殖,按一定方向性排列,呈漩涡状或束状,传代后细胞增殖迅速,生长稳定。腱组织提取物诱导后,MTT实验显示ADSC增殖活性并未发生明显改变,与对照组间没有统计学差异(p>0.05)。行Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色显示：实验组为阳性,对照组阴性；RT-PCR检测显示肌腱发育相关基因(CollagenⅠ、CollagenⅢ基因)表达明显增加(p<0.01)。研究结论1.腱组织提取物不能改变大鼠ADSC的增殖活性2.腱组织提取物可以促进大鼠ADSC向肌腱细胞方向分化

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
缩略词表  9-10
第一章 前言  10-12
第二章 材料与方法  12-18
  2.1 实验动物  12
  2.2 主要仪器设备  12
  2.3 主要实验试剂  12-13
  2.4 主要实验试剂的配制  13-14
  2.5 实验方法  14-17
  2.6 统计学方法  17-18
第三章 结果  18-23
  3.1 脂肪干细胞的体外培养和形态学观察  18
  3.2 肌腱细胞的体外培养和形态学观察  18-19
  3.3 ADSC的鉴定  19
  3.4 ADSC的生长曲线  19
  3.5 腱组织提取物诱导后ADSC形态学观察  19-20
  3.6 MTT法测定干预后细胞增殖活性  20-21
  3.7 Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色  21
  3.8 RT-PCR检测Collagen Ⅰ、CollagenⅢ基因表达  21-23
第四章 讨论  23-26
  4.1 脂肪干细胞的提取与扩增  23-24
  4.2 ADSC的鉴定  24
  4.3 ADSC的增殖活性测定  24-25
  4.4 体外诱导ADSC向肌腱细胞方向分化  25
  4.5 腱组织提取物对于ADSC增殖、分化能力的影响  25-26
第五章 结论  26-27
参考文献  27-30
综述  30-47
  参考文献  40-47
致谢  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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