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秋水仙碱对TAO球后成纤维细胞增殖的影响

作　者: 刘燕
导　师: 许雪亮
学　校: 中南大学
专　业: 眼科学
关键词: 球后成纤维细胞甲状腺相关眼病秋水仙碱体外细胞培养凋亡 TGF-β
分类号: R771.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:观察体外培养的甲状腺相关眼病（TAO）球后成纤维细胞在秋水仙碱作用下其形态学的改变,研究秋水仙碱对体外培养的球后成纤维细胞增殖的影响,以及RF细胞源性TGF-β在秋水仙碱干预后所受影响及其作用。方法:一.TAO球后成纤维细胞原代、传代培养,其中第2-6代细胞用于实验研究:二.细胞培养过程中观察成纤维细胞的生长状况及形态学变化:将培养的细胞接种于50ml培养瓶,秋水仙碱组药物的终浓度分别为10^-4mol/L,10^-5mol/L,10^-6mol/L,10^-7mol/L,10^-8mol/L,空白对照组加入等体积RPMI-1640培养液,分别在第1天、第2天、第3天通过倒置相差显微镜、CCK-8法观察COLC作用后RF的形态学变化及其抑制细胞增殖的作用,进行显微照相并绘制出细胞生长曲线;三.取对数期生长的细胞,分为4组:空白对照组和COLC组(10^-6mol/L、10^-5mol/L和10^-4mol/L),与培养的细胞共育2天,收集细胞,用流式细胞仪检测药物对细胞凋亡的影响和细胞周期分布的变化;四.将对数期生长的RF细胞接种于置有盖玻片的六孔培养板中,分为2组,COLC组(10^-4mol/L)与空白对照组,采用免疫组织化学法测定RF细胞源TGF-β及药物对其影响。结果:一.细胞形态学观察:体外培养的TAO球后成纤维细胞呈典型的梭形或分枝状,胞体狭长,胞浆透亮,细胞融合后呈指纹状排列;经秋水仙碱干预24h,48h,72h后,除10^-8mol/L药物组细胞形态无明显改变,仅细胞密度较对照组降低,聚集的细胞减少,分裂相细胞亦较少,其余各组均出现不同程度的细胞凋亡形态变化。二.CCK-8法检测发现:秋水仙碱干预后RF细胞增殖受到抑制,各药物组A值与对照组相比均降低,并有统计学意义（P＜0.05）,且其对RF细胞生长的抑制率随着药物作用时间的延长和作用浓度的升高而增大（P＜0.05）。三.流式细胞仪检测发现:秋水仙碱对RF细胞有诱导凋亡作用,其主要抑制G2+M期,药物组细胞凋亡小体百分率与无药对照组比较差异均有显著性（P＜0.05）,且随着药物浓度的增加,各实验组处于G2+M期细胞的比例不断减少,G0/G1期细胞比例逐渐增多,表现出一定的剂量依赖性。四.免疫组织化学法检测发现在融合状态前的RF细胞可分泌TGF-β,而10^-4mol/L秋水仙碱作用后RF细胞密度明显减低,且部分RF细胞胞浆棕黄色颗粒减少甚至消失,阳性率降低,说明秋水仙碱可抑制RF细胞分泌TGF-β。结论:COLC对体外培养的TAO球后成纤维细胞具有抑制其增殖的作用,而且抑制作用呈剂量、时间效应性,其抑制作用具有细胞周期特异性,主要通过对细胞G2+M期的阻滞而实现。并且秋水仙碱可以抑制RF源TGF-β的分泌,这可能是秋水仙碱抑制RF细胞增殖的机制之一。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
第一章前言  9-11
第二章材料与方法  11-16
  2.1 材料  11-12
  2.2 实验方法  12-16
第三章结果  16-21
  3.1 秋水仙碱对RF细胞形态的影响  16
  3.2 CCK-8法检测细胞增殖结果  16-18
  3.3 流式细胞仪检测  18-20
  3.4 秋水仙碱对RF细胞分泌TGF-β的影响  20-21
第四章讨论  21-28
  4.1 甲状腺相关眼病与眼眶球后成纤维细胞  21-22
  4.2 秋水仙碱对甲状腺相关眼病 RF细胞增殖的影响  22-24
  4.3 秋水仙碱作用下RF细胞周期分布及凋亡率的变化  24-28
第五章结论  28-29
第六章附图  29-31
参考文献  31-33
综述秋水仙碱与眼科疾病  33-44
  参考文献  40-44
致谢  44

秋水仙碱对TAO球后成纤维细胞增殖的影响

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