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蝙蝠葛活性成分抗肿瘤作用及机制的研究

作　者: 杨万山
导　师: 孙抒
学　校: 延边大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 蝙蝠葛活性成分 人白血病K562细胞株 Caspase-9蛋白 Caspase-8蛋白 Caspase-3蛋白 细胞凋亡 生命延长率 抑瘤率 毒性实验
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


目的:研究蝙蝠葛活性成分体外对人白血病K562细胞株的抑制增殖和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制,以及蝙蝠葛活性成分体内对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用,为新药开发提供实验和理论依据。方法:应用MTT法检测蝙蝠葛活性成分对体外培养的人白血病K562细胞株的抑制增殖作用的影响及细胞毒活性;通过倒置显微镜、HE染色及透射电镜对K562细胞进行形态学观察;采用流式细胞仪检测K562细胞的周期分布相和细胞凋亡率;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡关键效应酶Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的表达情况,深入探讨蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株诱导凋亡的机制;采用寇氏（Korbor）法计算小鼠急性经口LD50及其95%可信限;用蝙蝠葛活性成分灌胃观察其对S180荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用;采用血清药理学实验方法,观察含药血清体外对人肺癌A549细胞株抗增殖作用:采用生命延长率实验方法,用蝙蝠葛活性成分灌胃观察其对S180肉瘤小鼠的生命延长作用。结果:（1）MTT比色法结果表明,蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性（P＜0.01）;（2）倒置显微镜观察:蝙蝠葛活性成分20μg/ml作用后早期细胞出现凋亡形态学变化:细胞膜鼓泡、凋亡小体形成等;作用晚期细胞发生膜破裂坏死;（3）HE染色:蝙蝠葛活性成分20μg/ml作用细胞后出现典型凋亡形态变化凋亡小体形成、细胞核浓缩呈蓝黑色、胞浆呈淡红色等,核染色质浓缩、呈碎块状;（4）透射电镜观察结果:蝙蝠葛活性成分20μg/ml作用细胞后出现核染色质致密浓缩或断裂,形成大小不等的凋亡小体;（5）流式细胞仪检测结果显示:蝙蝠葛活性成分可以诱导K562细胞发生凋亡,加药组出现亚二倍体峰,并且G0/G1期细胞比例显著增加（P＜0.01）,而S期和G2/M期细胞比例则明显下降,将细胞阻滞在G0/G1期;（6）免疫细胞化学结果表明:蝙蝠葛活性成分作用后加药组Caspase—9、Caspase-8和Caspase-3表达增加,与对照组相比较均有显著差异（P＜0.01）;（7）急性毒性实验结果,蝙蝠葛活性成分的小鼠急性经口LD50及其95%可信限为52.72g/kg和38.12—63.87g/kg;（8）蝙蝠葛活性成分小、中、大剂量组对小鼠移植性肉瘤S180实体瘤的抑瘤率分别为17.19%、33.43%、42.29%,有显著的抑制作用（与模型组比较,中剂量组P＜0.05,大剂量组P＜0.01）;（9）血清药理学实验结果,终浓度分别为10%、20%、25%的灭活的含药（蝙蝠葛活性成分）大白鼠血清对A549细胞株的增殖抑制率分别为29.03%、30.55%、41.67%,对照组相比P＜0.05;（10）生命延长率实验结果小剂量及中剂量组延长率为41.66%与33.33%,与对照组相比P＜0.05。结论:1、蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡作用。2、蝙蝠葛活性成分对K562细胞抑制增殖作用在20μg/ml作用24h之前主要以诱导凋亡为主。3、蝙蝠葛活性成分诱导凋亡作用机制可能与细胞周期发生G0/G1期阻滞有关;并且通过上调Caspase-9、spase-8和Caspase-3蛋白表达,经由细胞凋亡的死亡受体通路和线粒体通路完成凋亡的启动和执行。4、蝙蝠葛活性成分对S180荷瘤小鼠具有延长生命的作用,同时对小鼠移植性S180肉瘤具有抑制作用。5、蝙蝠葛活性成分含药血清在体外对人肺癌A549细胞株增殖有抑制作用。6、急性毒性实验结果,蝙蝠葛活性成分属低毒中药,具有显著的抑肿瘤作用,有望开发成一种新的抗肿瘤药物。

全文目录


中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-12
第一章 材料与方法  12-18
  1.1 材料  12-13
  1.2 方法  13-17
  1.3 统计学处理  17-18
第二章 结果  18-26
  2.1 MTT法检测蝙蝠葛活性成分对K562人白血病细胞株的抗增殖作用  18
  2.2 K562人白血病细胞的形态学改变  18-19
  2.3 流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期改变  19-20
  2.4 凋亡关键效应酶与凋亡相关蛋白的表达水平的检测  20-21
  2.5 急性毒性实验结果  21
  2.6 蝙蝠葛活性成分对小鼠S_(180)实体瘤的抑瘤作用  21-22
  2.7 蝙蝠葛活性成分含药血清在体外对肺癌A_(549)细胞株的增殖抑制作用  22
  2.8 蝙蝠葛活性成分对S180肉瘤荷瘤小鼠生命延长率的影响  22-23
  附图  23-26
第三章 讨论  26-33
  3.1 蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株的增殖抑制作用  26-27
  3.2 蝙蝠葛活性成分对人白血病K56细胞株的诱导凋亡作用  27-29
  3.3 蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株细胞凋亡通路的调控作用  29-30
  3.4 蝙蝠葛活性成分体内抑瘤作用  30-31
  3.5 蝙蝠葛活性成分含药血清体外对人肺癌A549细胞的影响  31-33
第四章 结论  33-34
致谢  34-35
参考文献  35-37
综述  37-46
  参考文献  45-46

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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