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siRNA对肝癌细胞中异常表达FAT10基因的抑制效应研究

作　者: 刘天德
导　师: 邵江华
学　校: 南昌大学
专　业: 外科学
关键词: 原发性肝细胞癌类泛素蛋白小干扰核糖核酸基因肿瘤抑制
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:设计和筛选有效抑制类泛素蛋白FAT10表达的siRNA序列,利用脂质体转染人肝细胞癌Hep3B细胞并研究对其生物学特性的影响。为进一步研究肝癌的发病及发生机制提供理论依据。方法:一、针对FAT10基因设计4条siRNA序列,并转染至人肝细胞癌Hep3B细胞,通过半定量RT-PCR、实时荧光定量PCR观察FAT10 mRNA表达下降的变化,筛选出最佳干扰片段及最佳干扰条件。二、转染入Hep3B细胞中,利用免疫细胞化学法检测FAT10蛋白变化情况。三、观察Hep3B细胞在FAT10基因表达变化后的细胞生物学特性变化,包括细胞计数法观察细胞生长抑制情况,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期变化情况。结果:一、脂质体转染FAM-siRNA后,倒置荧光显微镜下随机计数有绿色荧光的细胞,表明其有较高的转染效率。二、将siRNA转染Hep3B细胞后,通过半定量RT-PCR、荧光定量PCR及免疫细胞化学法检测,FAT10 mRNA及蛋白表达明显下调。三、降低FAT10基因表达后,Hep3B细胞生物学行为发生变化:Hep3B细胞生长受到明显抑制,Hep3B细胞的增殖受抑制并使其细胞周期阻滞于G0/G1期。结论: siRNA降低Hep3B细胞FAT10基因表达后,能抑制其细胞的生长,能为肝癌的发病、发生机制提供理论依据,并有可能成为肝癌的诊断、治疗及术后检测的靶基因。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-6
第1章引言  6-9
第2章材料  9-12
  2.1 细胞株  9
  2.2 主要试剂  9
  2.3 自配试剂 (1) D-Hank’s 液  9-10
  2.4 主要仪器设备  10-12
第3章方法  12-21
第4章结果  21-27
第5章讨论  27-30
第6章结论  30-31
致谢  31-32
参考文献  32-34
综述  34-42
  参考文献  40-42
攻读学位期间的研究成果  42

siRNA对肝癌细胞中异常表达FAT10基因的抑制效应研究

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