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五没食子酰基葡萄糖抑制卵巢癌细胞增殖及其机制的研究

作　者: 石大禹
导　师: 朱家勇
学　校: 广东药学院
专　业: 病原生物学
关键词: 五没食子酰基葡萄糖 卵巢癌 细胞周期 细胞凋亡 Caspases NF-κB
分类号: R737.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


五没食子酰基葡萄糖(pentagalloylglucose ,PGG)是一种天然多酚化合物,自然界中分布及其广泛。之前的研究表明PGG具有多种生物活性,具有治疗和预防一些重要疾病如炎症、肿瘤以及糖尿病的潜能,对宿主没有毒副作用。卵巢癌是主要的妇科肿瘤之一,目前没有有效的治疗药物。本课题选取不同的卵巢癌细胞株作为实验对象,研究五没食子酰基葡萄糖对卵巢癌细胞增殖的影响,并初步探讨可能的分子机制。实验方法:1.使用MTT实验研究PGG在体外对卵巢癌HO-8910、HO-8910PM与SKOV-3细胞增殖的影响,使用普通光学倒置显微镜观察PGG处理后细胞形态改变。2.使用PI单染流式细胞检测分析PGG对卵巢癌细胞细胞周期分布影响;使用Hoechst染色PGG处理之后的细胞,在荧光显微镜下观察细胞核形态的变化,看是否出现凋亡特征,然后使用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞分析检测PGG对卵巢癌细胞凋亡率的影响。3. Western blot用于检测细胞内Caspase家族成员的剪切情况,出现Caspase相应的剪切小片段证明PGG激活了细胞内Caspase凋亡信号通路;Western blot还用于检测NF-κB转录因子的P65亚基与其抑制蛋白IκB在细胞质与细胞核中的分布变化,确定PGG对NF-κB信号通路的影响。4. RT-PCR用来研究PGG对NF-κB的靶基因bcl-2、bcl-xl、ciap-1、ciap-2、survivin、niap、xiap、cyclinD1转录影响,这些基因是肿瘤细胞中的促存活基因。实验结果1. PGG能以时间与浓度依赖的方式抑制卵巢癌细胞HO-8910、HO-8910PM与SKOV-3体外增殖,当PGG剂量大于20μM,或作用时间达到48 h时,PGG对卵巢癌细胞的抑制呈现出明显的时间与剂量依赖关系(P<0.05)。2. PGG改变三株卵巢癌细胞的细胞周期分布,诱导卵巢癌HO-8910与HO-8910PM细胞凋亡。随着PGG处理剂量增加与作用时间延长,细胞周期向S-期富集。Hoechst染色显示,PGG诱导了HO-8910细胞的核发生凋亡样形态改变,对SKOV-3细胞膜与细胞核形态没有影响;AnnexinV-FITC染色结合流式细胞分析显示PGG诱导HO-8910与HO-8910PM细胞凋亡出现早期凋亡,但是对SKOV-3细胞凋亡影响较小。3. PGG处理之后卵巢癌细胞内出现了几个Caspases家族成员的活性形式,出现相应的c-Caspase-9、3、7;PGG虽然上调了外源性凋亡途径中上游的肿瘤坏死因子受体表达,但是抑制了Caspase-8的剪切。4. PGG处理卵巢癌细胞抑制转录因子NF-κB的P65亚基核转位,伴随着其抑制性蛋白IκB在细胞质中积累;相应地,PGG下调了NF-κB的几个靶基因bcl-2、bcl-xl、surviving、niap、xiap、cyclinD1的mRNA表达。但是上调了ciap-1、ciap-2的mRNA的表达,对bax的mRNA表达没有影响。结论PGG能抑制卵巢癌细胞的体外增殖,其机制涉及PGG诱导细胞周期S-期阻滞与诱导细胞凋亡。PGG可能通过抑制细胞内致癌转录因子NF-κB的活性,下调其凋亡抑制基因的表达,诱导细胞进入内源性Caspase凋亡途径,从而导致细胞死亡。

全文目录


中文摘要  7-9
Abstract  9-12
第一章 序言  12-23
  1.1 研究背景  12-20
    1.1.1 五没食子酰基葡萄糖的化学结构与来源  12
    1.1.2 五没食子酰基葡萄糖的药理学活性及其机制  12-20
  1.2 立题依据  20-22
    1.2.1 卵巢癌  20-21
    1.2.2 研究意义  21-22
  1.3 研究思路  22-23
第二章 PGG 抑制卵巢癌细胞体外增殖  23-32
  2.1 前言  23-24
  2.2 实验材料  24
    2.2.1 细胞  24
    2.2.2 主要试剂和耗材  24
    2.2.3 主要仪器设备  24
  2.3 主要溶液配制  24-25
  2.4 实验方法  25-27
    2.4.1 细胞培养  25
    2.4.2 MTT 实验  25-26
    2.4.3 光学显微镜观察细胞形态变化  26
    2.4.4 统计分析  26-27
  2.5 实验结果  27-29
    2.5.1 PGG 抑制不同卵巢癌细胞株体外增殖  27-28
    2.5.2 PGG 对卵巢癌细胞形态的影响  28-29
  2.6 讨论  29-32
第三章 PGG 诱导卵巢癌细胞周期阻滞与凋亡  32-52
  3.1 前言  32-33
  3.2 实验材料  33-34
    3.2.1 细胞  33
    3.2.2 主要试剂与耗材  33-34
    3.2.3 主要仪器设备  34
  3.3 主要溶液配制  34
  3.4 实验方法  34-38
    3.4.1 细胞培养  34
    3.4.2 细胞周期分析  34-35
    3.4.3 细胞凋亡检测（Hoechst 染色法）  35-36
    3.4.4 细胞凋亡检测（AnnexinV-FITC/PI 法）  36-38
  3.5 实验结果  38-50
    3.5.1 PGG 诱导卵巢癌细胞周期阻滞  38-44
    3.5.2 PGG 诱导的卵巢癌细胞凋亡  44-50
  3.6 讨论  50-52
第四章PGG 诱导卵巢癌HO-8910 细胞凋亡的Caspase 途径  52-65
  4.1 前言  52-55
  4.2 实验材料  55-56
    4.2.1 细胞  55
    4.2.2 主要试剂与耗材  55-56
    4.2.3 主要仪器设备  56
  4.3 主要溶液配制  56-57
  4.4 实验方法  57-62
    4.4.1 细胞培养与药物处理  57-58
    4.4.2 细胞全蛋白提取  58
    4.4.3 蛋白质定量  58-59
    4.4.5 Western Blot 检测细胞中Caspase 通路的活化状况  59-62
  4.5 实验结果  62-64
  4.6 讨论  64-65
第五章PGG 对卵巢癌细胞NF-κB 信号及其靶基因表达的影响  65-79
  5.1 前言  65-66
  5.2 实验方法  66-67
    5.2.1 细胞  66
    5.2.2 主要试剂与耗材  66-67
    5.2.3 主要实验仪器  67
  5.3 溶液配制  67
  5.4 实验方法  67-73
    5.4.1 细胞培养与处理  67-68
    5.4.2 细胞总RNA 的提取与质量鉴定  68-69
    5.4.4 RT-PCR 检测基因表达变化  69-71
    5.4.5 细胞质蛋白与细胞核蛋白提取  71-72
    5.4.6 Western Blot 检测p65 与IκB 在细胞质与细胞核中的分布  72-73
  5.5 实验结果  73-75
    5.5.1 细胞总RNA 的提取与质量鉴定  73
    5.5.2 PGG 对周期与凋亡调控因子mRNA 表达的影响  73-75
    5.5.3 PGG 抑制HO-8910 细胞内NF-κB 信号  75
  5.6 讨论  75-79
第六章 总结与展望  79-81
  6.1 全文总结  79
  6.2 研究展望  79-81
参考文献  81-87
文献综述  87-93
攻读学位期间科研情况与所受奖励  93-94
附录I：五没食子酰基葡萄糖的药效靶位  94-95
附录II 英文缩写语中文对照  95-96
致谢  96

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 卵巢肿瘤
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