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东北红豆杉（Taxus cuspidata）中非紫杉醇类化合物抑制妇科肿瘤细胞增殖活性及其作用机制的研究

作　者: 李珊
导　师: 张红真；董玫
学　校: 河北医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: 东北红豆杉 妇科肿瘤细胞株 MTT法 凋亡 流式细胞仪
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:自从20世纪70年代美国化学家Wani等从短叶红豆杉(Taxus brevifolia)的树皮中提取一种针状结晶物质——紫杉醇(Taxol),特别是发现此物质对癌细胞具有显著的抑制作用以来,国内外许多学者把精力投入到对该属植物的化学成分分析和生理活性的研究上来,并对其进行开发利用。近年来,人们已从该属植物中分离得到紫杉烷二萜、生物碱等化学成分。其中,尤以紫杉烷类成分研究较多。本实验旨在研究东北红豆杉中非紫杉醇类化合物对体外培养的人子宫颈癌细胞株(HeLa)、人子宫内膜癌细胞株(HEC-1)、人卵巢透明癌细胞株(SHIN-3)、人卵巢透明癌细胞株(HOC-21)和人卵巢囊腺癌细胞株(HAC-2)增殖的抑制作用,并初步探讨其抑制细胞增殖的作用机制。方法:1肿瘤细胞株悬液制备用RPMI1640完全培养液将HeLa等肿瘤细胞株调整为浓度2×105个细胞/mL的细胞悬液备用。2四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法将肿瘤细胞株悬液接种于96孔培养板,每孔50μL (含1×104个细胞),分别加入空白对照磷酸盐缓冲液、溶剂对照0.05%二甲基亚砜和阳性对照紫杉醇以及1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L单体化合物各50μL,每组均设3个复孔。培养48 h,于培养结束前4 h,各培养孔加入MTT 10μL。培养结束后,弃去培养上清,每孔加入反应停止液150μL,振荡10 min,使结晶充分溶解,用酶联免疫检测仪检测各孔吸光度(OD)值。每个实验均重复3次。3 AnnexinⅤ-FIFC/ PI双染流式细胞术细胞传代进入对数生长期,实验组加入50μmol/L的2-Deacetoxytaxinine J,空白对照组加入磷酸盐缓冲液,于培养48 h后收集细胞,用4℃预冷的PBS洗细胞两次,用250μL结合缓冲液重新悬浮细胞,调整其浓度为1×106/mL,取100μL的细胞悬液于5 mL流式管中,加入5μLAnnexinⅤ/FITC和10μL,20μg/mL的碘化丙锭溶液,混匀后于室温避光孵育15 min,在反应管中加400μL稀释后的结合缓冲液,及时上流式细胞仪分析。每次实验均重复3次。结果:1四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法结果显示:1.1以1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L的Compound 1处理HEC-1细胞48 h后,其生存率分别为95.87%、60.74%和37.92%,并呈现较好的剂量依赖关系,其中10μmol/L和100μmol/L浓度组与空白对照相比均有显著性差异(P<0.01);以100μmol/L的Compound 1处理HeLa、SHIN-3、HOC-21和HAC-2细胞48 h后,其生存率分别为26.93%、52.43%、55.07%和42.32%,对细胞增殖显示较强的抑制活性,与空白对照组相比,均有非常显著性的差异(P<0.01)。其中Compound 1对HeLa和HEC-1细胞的增殖显示较强的抑制活性,其半数抑制浓度(IC50)分别约为51.33μmol/L和32.52μmol/L,100μmol/L组与空白对照组相比均具有非常显著性的差异(P<0.01)。1.2以100μmol/L的Compound 2处理HeLa和HEC-1细胞48 h后,其生存率分别为70.29%和69.73%,与空白对照组相比,具有非常显著性的差异(P<0.01);以10μmol/L和100μmol/L的Compound 2处理HAC-2细胞,其生存率分别为87.48%和67.30%,100μmol/L组与空白对照组相比,具有显著性差异(P<0.05);Compound 2用1μmol/L、10μmol/L和10μmol/L处理细胞,其生存率为86.84%、86.99%和69.36%,对SHIN-3细胞增殖显示较弱的抑制活性。1.3以100μmol/L的Compound 3处理HeLa、HOC-21和HAC-2细胞48 h后,其生存率分别为64.61%、67.31%和,60.47%,对细胞增殖显示较强的抑制活性,与空白对照组相比,具有非常显著性的差异(P<0.01);用100μmol/L的Compound 3处理HEC-1细胞,其生存率为69.23%,对HEC-1细胞增殖显示较弱的抑制活性,与空白对照组相比,具有显著性的差异(P<0.05);Compound 3用1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L处理细胞48 h后,其生存率为88.58%、84.82%和70.75%,对SHIN-3细胞增殖显示较弱的抑制活性,10μmol/L和100μmol/L浓度组与空白对照组相比,具有非常显著性差异(P<0.01)。2 Annexin-Ⅴ/ PI双染流式细胞术检测结果以50μmol/L的Compound 1处理HeLa细胞,结果显示HeLa细胞早期凋亡率为(48.51±6.84)%,PBS组为(3.47±3.82)%,Compound 1的50μmol/L浓度组与PBS组相比,具有显著性差异(P<0.05)。流式细胞检测进一步证实2-Deacetoxytaxinine J具有明显诱导HeLa细胞发生凋亡的活性,与MTT结果相符。结论:1东北红豆杉中三种非紫杉醇类化合物在体外对HeLa、HEC-1、SHIN-3、HOC-21和HAC-2细胞增殖有不同的抑制活性。其中2-Deacetoxytaxinine J对HeLa和HEC-1细胞的增殖显示较强的抑制活性。2东北红豆杉中非紫杉醇类化合物2-Deacetoxytaxinine J抑制HeLa细胞增殖活性的作用机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

全文目录


中文摘要  4-8
英文摘要  8-13
研究论文 东北红豆杉(Taxus cuspidata)中非紫杉醇类化合物抑制妇科肿瘤细胞增殖活性及其作用机制的研究  13-43
  前言  13-14
  材料与方法  14-20
  结果  20-26
  附图、附表  26-34
  讨论  34-39
  参考文献  39-43
综述 二萜类化合物的生物活性研究进展  43-57
致谢  57-58
个人简历  58

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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