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肌醇六磷酸对人结肠癌细胞系HT-29生物学行为的影响

作　者: 张晓妮
导　师: 宋扬
学　校: 青岛大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 肌醇六磷酸 结肠癌 HT-29 增殖 分化 凋亡 生物学行为
分类号: R735.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:用肌醇六磷酸（Inositol Hexaphosphate,IP6）作用于人结肠癌细胞系HT-29不同时间,观察IP6作用不同时间对HT-29细胞生物学行为的影响并对其作用机制进行探讨。方法:1将3.3mmol/L的IP6作用于HT-29细胞不同时间（3d、6m、12m）,以未经IP6作用的HT-29细胞作为对照,通过裸鼠体内接种致瘤的方法观察IP6对HT-29细胞致瘤性的影响;2将3.3mmol/L的IP6作用于HT-29细胞不同时间（3d、6m、12m）,以未经IP6作用的HT-29细胞作为对照,应用双层软琼脂培养测定细胞克隆形成率的变化;分光光度法测定细胞内肠型碱性磷酸酶（IAP）和细胞培养液内乳酸脱氢酶（LDH）活性的改变;RT-PCR法检测细胞内bcl-2、c-Myc mRNA的表达变化;免疫细胞化学法检测细胞内增殖细胞核抗原（PCNA）及细胞色素c（Cyt-c）表达的改变。结果:1裸鼠体内移植瘤实验结果显示,IP6作用组HT-29细胞裸鼠体内移植瘤的成瘤时间较对照组长,成瘤率较对照组低,最终形成肿瘤的体积也明显小于对照组,而且这些作用都表现出明显的时间依赖性。2双层软琼脂培养结果表明,经IP6作用的HT-29细胞的集落形成能力随作用时间的延长逐渐降低,而克隆形成抑制率随作用时间的延长逐渐升高。3分光光度法结果显示:各实验组细胞内肠型ALP比活性与对照组相比均显著升高（P＜0.01）,且各实验组之间表现出明显的时间依赖趋势（各实验组之间相比均为P＜0.05）;细胞培养液中LDH活性测定结果显示各实验组细胞培养液中LDH活性均高于对照组且差别具有高度统计学意义（P＜0.01）。随着IP6作用时间的延长,细胞培养液内的LDH活性逐渐升高（各实验组之间相比均为P＜0.05）。4 RT-PCR实验结果显示,与对照组相比,各IP6作用组bcl-2和c-Myc mRNA表达均显著降低,差别具有高度统计学意义（P＜0.01）;而且bcl-2和c-Myc mRNA表达均表现出随IP6作用时间延长而逐渐降低的趋势。5免疫细胞化学实验结果表明:不同作用时间的IP6均可抑制HT-29细胞内的PCNA蛋白表达（P＜0.05）,并且随着作用时间的延长,PCNA蛋白的表达随之降低（各IP6作用时间组之间相比均为P＜0.05）;不同作用时间的IP6作用均可升高细胞内细胞色素c（Cyt-c）的水平（P＜0.01）,且随作用时间的延长,Cyt-c蛋白的表达有升高的趋势（各IP6作用时间组之间相比均为P＜0.05）。结论:1、IP6作用能够使HT-29细胞裸鼠体内致瘤能力的降低,表现为成瘤时间延长、成瘤体积减小及成瘤率降低,作用具有时间依赖趋势。2、IP6能够抑制HT-29细胞的增殖,使细胞克隆形成能力降低及细胞内PCNA水平的降低,且随作用时间的延长作用更加明显。3、IP6具有促进HT-29细胞分化的作用,这一作用表现在细胞集落形成能力的降低、细胞内分化相关基因c-Myc表达的减低以及分化标志酶—肠型碱性磷酸酶比活性的升高,作用表现出明显的时间依赖趋势。4、IP6可以促进HT-29细胞发生凋亡,这一作用可能与bcl-2、Cyt-c参与的线粒体凋亡通路密不可分,且与作用时间关系密切。

全文目录


摘要  2-4
Abstract  4-7
引言  7-9
第一章 实验材料与方法  9-19
  1.1 主要试剂  9
  1.2 人结肠癌细胞系HT-29  9
  1.3 实验仪器  9
  1.4 IP_6溶液的制备  9-10
  1.5 人结肠癌细胞系HT-29细胞培养方法  10-11
  1.6 裸鼠体内致瘤实验  11
  1.7 双层软琼脂培养测定细胞克隆形成率  11-12
  1.8 肠型碱性磷酸酶(IAP)比活性测定  12-13
  1.9 细胞培养液乳酸脱氢酶活性测定  13-14
  1.10 RT-PCR法检测IP6作用不同时间对HT-29细胞内bcl-2、c-Myc mRNA表达的影响  14-17
  1.11 免疫细胞化学法检测IP_6作用不同时间对HT-29细胞内PCNA、Cyt-c蛋白表达的影响  17-18
  1.12 统计学方法  18-19
第二章 结果  19-30
  2.1 裸鼠体内致瘤实验  19-21
  2.2 双层软琼脂培养测定细胞克隆形成率  21-22
  2.3 肠型碱性磷酸酶比活性测定  22-23
  2.4 HT-29细胞培养液中乳酸脱氢酶活性测定  23-24
  2.5 RT-PCR法检测IP6作用不同时间对HT-29细胞内bcl-2 mRNA表达的影响  24-26
  2.6 RT-PCR法检测IP_6作用不同时间对HT-29细胞内c-Myc mRNA表达的影响  26-27
  2.7 免疫细胞化学法检测IP6作用不同时间对HT-29细胞内PCNA、Cyt-c蛋白表达的影响  27-30
第三章 讨论  30-35
结论  35-36
参考文献  36-39
综述  39-54
  参考文献  49-54
攻读学位期间的研究成果  54-55
致谢  55-57

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤
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