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利奈唑胺和万古霉素对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌防耐药变异浓度的研究

作　者: 李静
导　师: 赵建宏
学　校: 河北医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 金黄色葡萄球菌 利奈唑胺 万古霉素 防耐药变异浓度 抗菌活性 基因突变 耐药
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:检测利奈唑胺和万古霉素对临床分离金黄色葡萄球菌的抗菌活性及两种药物对临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药突变株的选择能力,并比较其防耐药突变的能力;在分子水平上初步探讨万古霉素耐药突变株药物敏感性下降的可能机制。方法:严格按照临床和实验室标准研究院(CLSI)推荐的琼脂平板二倍稀释法测定利奈唑胺和万古霉素对105株金黄色葡萄球菌临床分离株(其中MRSA 85株)的最低抑菌浓度(MIC)。质控菌株跟随每批试验,以确保整个试验的准确性;肉汤富集法使细菌浓度达到1010CFU/ml,平板稀释法测定利奈唑胺和万古霉素对56株临床分离MRSA的防耐药变异浓度(MPC)。分别取100μl菌液均匀涂布在含有抗菌药物的MH平板上,每个浓度4个平板,使每个药物浓度的细菌接种量为1.2×1010CFU。37℃孵育,每间隔24小时观察菌落生长情况,以72小时没有菌落生长的最低药物浓度为MPC。利用Sau-PCR和脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因指纹技术比对万古霉素防耐药变异浓度测定过程中筛选出的耐药突变株,与其原始菌株在基因上的差异;对基因分型有差异的菌株通过聚合酶链(PCR)反应,扩增graS基因;利用变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)检测在该基因上是否存在突变。结果: 1利奈唑胺和万古霉素对105株金黄色葡萄球菌的MIC90均为2μg/ml;MIC50分别为2μg/ml和1μg/ml;MIC范围分别为1～4μg/ml和0.5～4μg/ml。我们试验结果中万古霉素的MIC90较大,达到2μg/ml,这是新修订CLSI标准万古霉素敏感的界值,且有2株菌的MIC达到了4μg/ml。2利奈唑胺和万古霉素对56株临床分离MRSA菌的MPC90分别为4μg/ml和20.5μg/ml;MPC90/ MIC90分别为2、10.25。该56株MRSA检测结果显示万古霉素和利奈唑胺MPC均小于血药峰浓度Cmax,血药浓度落在突变选择窗之上。利奈唑胺的选择指数(SI=MPC90/ MIC90)较万古霉素小,即利奈唑胺对金黄色葡萄球菌菌的突变选择窗较万古霉素的窄。3 56株受试菌经万古霉素MPC测定后耐药突变株,重新进行了MIC的测定,筛选出的耐药突变株的MIC50为2μg/ml、MIC90为4μg/ml。4 Sau-PCR和PFGE基因指纹技术分析,万古霉素筛选出的部分耐药突变株与其原始菌株在基因分型上存在差异。5对两对基因型有差异的菌株,DGGE检测graS基因突变点,电泳图上未发现电泳条带位置的区别。结论: 1利奈唑胺和万古霉素对石家庄地区临床分离金黄色葡萄球菌的抗菌活性均较好,尚未发现耐万古霉素和利奈唑胺的金黄色葡萄球菌菌株。但我们的结果提示万古霉素的抗菌活性在下降,应引起高度重视。2利奈唑胺和万古霉素作用于MRSA均不容易筛选出耐药突变株。利奈唑胺限制临床分离MRSA耐药突变菌株的选择能力强于万古霉素,利奈唑胺较万古霉素更不容易筛选出耐药突变株。其机制是否与临床应用时间短或其特有的作用机理有关,尚待进一步研究。3万古霉素MPC测定试验筛选出的耐药突变株,较原始菌株对万古霉素的耐药性增加。4在临床经过万古霉素长期作用后可能会因这些突变菌的富集从而造成临床感染菌株部分基因的变化。5通过DGGE检测未发现graS基因突变。提示可能存在有其它基因位点的突变,或另外的耐药机制。

全文目录


中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
研究论文 利奈唑胺和万古霉素对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药变异浓度 的学位论文">防耐药变异浓度的研究  12-51
  引言  12-14
  第一部分 利奈唑胺和万古霉素对临床分离MRSA 防耐药变异浓度的测定  14-30
    前言  14-15
    材料与方法  15-18
    结果  18-19
    附图  19-20
    附表  20-23
    讨论  23-26
    小结  26
    参考文献  26-30
  第二部分 万古霉素突变选择窗内筛选出的金黄色葡萄球菌突变株耐药机制的初步研究  30-50
    前言  30-31
    材料与方法  31-38
    结果  38-40
    附图  40-44
    讨论  44-46
    小结  46
    参考文献  46-50
  结论  50-51
综述 抗菌药物耐药突变选择窗的研究进展  51-65
致谢  65-66
个人简历  66

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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