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硅化合物SILA409对人小细胞肺癌GRP78表达及与VP-16耐药的研究

作　者: 李恩成
导　师: 王琪
学　校: 大连医科大学
专　业: 内科学
关键词: 小细胞肺癌 GRP78 多药耐药 SILA409
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:检测人小细胞肺癌NCI-H446细胞株在一种新型硅化合物SILA409作用下GRP78核酸和蛋白的表达及NCI-H446细胞株对VP-16细胞生存率的变化,进而研究SILA409这种硅化合物对GRP78表达的影响及其与VP-16化疗耐药的相关性。方法:将生长状态良好的（对数生长期）、适宜密度的NCI-H446细胞随机分为实验组和对照组,其中实验组又分为A23187处理组、A23187→SILA409处理组和SILA409处理组,采用RT-PCR方法检测实验组和对照组中NCI-H446细胞GRP78核酸的相对表达水平,采用Western blot和免疫荧光细胞化学的方法检测实验组和对照组中NCI-H446细胞GRP78蛋白的相对表达水平,利用MTT方法检测实验组和对照组中NCI-H446细胞对化疗药VP-16的生存率并计算出各组的半数致死浓度IC50值,此外还应用了DAPI染色方法观察细胞核形态进而验证细胞的凋亡情况。根据NCI-H446不同组细胞的核酸及蛋白的表达水平及细胞在VP-16作用下的生存率变化分析SILA409对细胞GRP78表达的影响及其在VP-16化疗耐药中的作用。采用统计软件SPSS 11.5对实验数据进行单因素方差分析,以P<0.05视为有统计学差异,所有实验均至少重复三次。结果:1.RT-PCR结果显示,与对照组相比,A23187处理组细胞GRP78核酸水平明显升高（P<0.05）;与A23187处理组相比,A23187→SILA409处理组细胞GRP78核酸水平明显降低（P<0.05）,但随着SILA409剂量增加未见剂量依赖关系;而SILA409处理组与对照组细胞相比,GRP78核酸水平表达无明显变化（P>0.05）。2.Western blot结果显示,与对照组相比,A23187处理组细胞GRP78蛋白水平明显升高（P<0.05）;与A23187处理组相比,A23187→SILA409处理组细胞GRP78蛋白水平明显降低（P<0.05）,但随着SILA409剂量增加亦未见剂量依赖关系;而SILA409处理组与对照组细胞相比,GRP78蛋白水平的表达亦无明显变化（P>0.05）。3.免疫荧光细胞化学检测结果显示,GRP78蛋白绿色荧光均匀分布于细胞浆,其中A23187处理组荧光强度最强,A23187→SILA409处理组荧光强度比A23187处理组弱,SILA409处理组荧光强度与对照组比无差异,该结果与Western blot结果一致。4.根据MTT检测结果生成的生存曲线显示,与对照组相比,A23187处理组细胞生存率明显提高（P<0.05）;与A23187处理相比,A23187→SILA409处理组细胞生存率降低（P<0.05）;而SILA409处理组与对照组细胞相比,生存率未见明显变化。经公式计算,各组细胞的IC50值存在差异:与A23187处理组相比,SILA409处理组和A23187-SILA409处理组细胞对VP-16的IC50明显减小,分别是（33.16±4.91 vs 47.21±8.34, and 33.05±2.97 vs 47.21±8.34,P<0.05）。5.DAPI染色结果显示:对照组和实验组细胞均出现了核固缩、变形、碎裂等,SILA409处理组和A23187→SILA409处理组细胞凋亡数目明显高于A23187处理组,而SILA409处理组与对照组相比凋亡率无明显变化,进而验证了MTT检测结果。结论:通过本实验研究可以得出以下结论1.SILA409对NCI-H446细胞GRP78的核酸、蛋白表达及细胞生存无影响;2. SILA409可以明显抑制经A23187诱导后的NCI-H446细胞GRP78核酸和蛋白的高表达;3.SILA409可以增加NCI-H446细胞对化疗药物VP-16的敏感性。以上结论提示我们通过SILA409抑制肺癌细胞GRP78的表达可能成为降低小细胞肺癌NCI-H446对VP-16耐药性的新思路与方法。

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摘要  6-8Abstract  8-10前言  10-11材料和方法  11-19结果  19-24讨论  24-26结论  26-27参考文献  27-29综述  29-39  参考文献  35-39附录  39-40致谢  40

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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