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Myotrophin在胃癌细胞株SGC7901和SGC7901/ADR中表达的差异性研究

作　者: 韩梅
导　师: 关宏伟
学　校: 大连医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: Myotrophin 多药耐药 SGC7901 SGC7901/ADR 肿瘤
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

引言:胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,在我国其发病率居各类肿瘤的首位,临床治疗手段主要有手术治疗、放射治疗、化学治疗。其中化疗对于消灭癌症的远处转移或防止复发,有其独到之处,是癌症治疗方法中不可缺少的组成部分。化疗在肿瘤治疗中的应用越来越广泛,但由于多药耐药(Multi-drug Resistance,MDR)的产生,化疗效果往往不佳,严重影响患者的生存质量。恶性肿瘤的MDR机制复杂,蛋白组学研究为深入研究肿瘤的MDR现象提供了新的思维方式和研究领域。90年代初期人类基因组计划开始实施,随着人类基因组计划的逐步完成,科学家们又进一步提出了后基因组计划,蛋白质组学研究是其中一个很重要的内容,为生命科学提供了一个新的研究平台,它从组织或蛋白质整体水平这一全新角度来研究肿瘤的MDR机制。本课题组之前应用双向凝胶电泳(Two-dimensional Gel Electro- phoresis,2-DE)技术有效分离并显示SGC7901、SGC7901/ADR和丹参逆转后SGC7901/ADR细胞的全蛋白,在2-DE图谱中寻找到14个与多药耐药密切相关的蛋白质,并通过高效液相色谱电喷雾电离飞行串联质谱对在SGC7901/ADR细胞中表达下调的7个蛋白质进行鉴定,结果表明Myotrophin有118个氨基酸构成,理论Mw12.9KDa,是调节细胞转录增殖的调控因子。近年来,Myotrophin的基因结构,生物学功能,在某些疾病中的作用机制等方面得到了深入的研究,但Myotrophin与MDR的关系尚未见报道。为了进一步探讨Myotrophin与胃癌多药耐药(MDR)的关系和阐明胃癌MDR机制,本研究应用免疫细胞化学,Western-blot和RT-PCR技术检测Myotrophin在SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的表达水平。目的:验证并检测Myotrophin在SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的差异性表达,进一步探讨Myotrophin与胃癌多药耐药(MDR)的关系。方法:将人胃癌细胞株SGC7901和SGC7901/ADR细胞进行体外传代培养,将细胞接种于6孔板的预处理盖玻片上,正常培养24小时以上,应用MaxVisionTM免疫组化法染色,将Myotrophin鼠抗人多克隆抗体按1:50稀释,观察和比较显色结果;用全蛋白提取试剂盒提供的方法分别提取SGC7901和SGC7901/ADR细胞的总蛋白,并用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度,以蛋白质水平检测和分析Myotrophin在SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的表达;用RNAiso Reagent裂解液分别提取两种细胞总RNA,应用RT-PCR方法从mRNA水平对Myotrophin在SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的表达进行检测和分析。结果:1、免疫细胞化学检测结果:Myotrophin在SGC7901细胞中呈高表达,染色为强阳性(+++),胞浆、胞核深染,呈棕黄色-棕褐色;Myotrophin在SGC7901/ADR细胞中表达下调,染色为弱阳性(+),胞浆、胞核淡染,呈淡黄色。2、Western-blot结果:分别提取SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的全蛋白,用考马斯亮蓝法测定SGC7901细胞全蛋白浓度为3.23ug/ul,SGC7901/ADR细胞全蛋白浓度为3.16ug/ul,并应用SDS-PAGE电泳和Western-blot免疫蛋白印记实验方法,经凝胶定量软件Quantity One和SPSS Statistics统计学软件分析发现,Myotrophin在SGC7901中蛋白平均表达量为0.707±0.035,Myotrophin在SGC7901/ADR细胞中蛋白平均表达量为0.24±0.07,比较均数,做两独立样本的t检验,统计学分析结果:P=0.02,P<0.05,有统计学意义,两者具有显著性差异,表明Myotrophin在SGC7901中呈高表达,在SGC7901/ADR细胞中表达下调。3、RT-PCR结果:分别提取SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的总RNA,用紫外线吸收法测定两种细胞总RNA浓度,应用半定量RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳实验方法,经凝胶定量软件Quantity One和SPSS Statistics统计学软件分析发现,结果显示Myotrophin基因总mRNA在SGC7901细胞中平均表达量为0.988±0.022,在SGC7901/ADR细胞中蛋白平均表达量为0.865±0.011,做两独立样本t检验的统计学分析,P=0.04,P<0.05,有统计学意义,两者具有显著性差异,表明Myotrophin基因总mRNA在SGC7901中呈高表达,在SGC7901/ADR细胞中表达下调。结论:1、Myotrophin蛋白在人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR中存在差异表达,在SGC7901细胞中呈高表达,在耐药细胞SGC7901/ADR中呈低表达;2、Myotrophin的mRNA在人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR中存在差异表达,在SGC7901细胞中呈高表达,在耐药细胞SGC7901/ADR中呈低表达;这种差异可能是由Myotrophin的转录过程受到抑制或Myotrophin的mRNA部分降解导致。3、Myotrophin在SGC7901细胞和耐药株SGC7901/ADR中的差异表达,可能与胃癌MDR有关。

全文目录

一、摘要 6-12 （一）中文摘要 6-9 （二）英文摘要 9-12二、正文 12-32 （一）前言 12-13 （二）材料和方法 13-21 （三）结果 21-24 （四）讨论 24-29 （五）结论 29-30 （六）参考文献 30-32三、综述 32-43 （一）正文 32-40 （二）参考文献 40-43四、致谢 43

Myotrophin在胃癌细胞株SGC7901和SGC7901/ADR中表达的差异性研究

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