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大麻素受体CB2在钛颗粒诱导假体周围骨溶解中作用的实验研究

作　者: 耿德春
导　师: 徐耀增
学　校: 苏州大学
专　业: 骨外科学
关键词: BALB/c小鼠骨溶解 air-pouch 组织学定量RT-PCR 炎症性骨溶解磨损颗粒大麻素受体2 AM630
分类号: R687.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

【目的】建立钛颗粒诱导小鼠air-pouch骨溶解模型,模拟人工关节无菌性松动发生的病理过程。【方法】雌性BLAB/c小鼠20只,背侧单点皮下注射3ml无菌空气,间隔1d补注1ml空气,连续5d,在背部形成气囊。囊内植入同种系小鼠颅骨,随机分为实验组和对照组,每组10只;术后1d实验组囊内注射0.5ml Ti颗粒(10mg/ml),对照组注射0.5ml生理盐水,14d后处死取材,进行组织学观察、TRAP染色并采用定量RT-PCR方法检测标本中RANK、RANKL和CPK基因mRNA含量。【结果】实验小鼠对植入骨片耐受性好,无免疫排斥;实验过程中无1例动物死亡。标本大体观察,钛颗粒刺激能够引起植入骨片周围出现红肿、渗出等明显的炎症变化。组织学检测发现,实验组标本囊壁增厚、细胞浸润增多;TRAP染色加深区域增多。经Ti颗粒刺激后,组织中RANK、RANKL及CPK基因mRNA含量明显增多,与对照组相比,差异有统计学意义(p<0.05)。【结论】钛颗粒诱导的小鼠air-pouch骨溶解模型,简单、灵敏、经济、重复性好,能较准确模拟人工关节松动发生的病理过程,为深入研究磨损颗粒诱导假体周围骨溶解奠定基础。【目的】探讨抑制大麻素受体CB2活性对人工假体周围骨溶解的影响,为临床治疗人工假体无菌性松动提供新的作用靶点。【方法】6-8周龄、体重20-23g、雌性BALB/c小鼠45只,其中15只作为颅骨供体。其余小鼠air-pouch囊内植入骨片后随机分为3组,即空白组(无钛颗粒)、钛颗粒组和药物组,每组10只。术后第1d起药物组经腹膜下注射大麻素受体CB2抑制剂-AM630(200μg/kg/d),持续2周。动物处死取材,大体观察植入骨片周围炎症变化;HE染色观察囊壁厚度、细胞浸润程度;VG染色分析骨溶解程度;TRAP染色检测成熟破骨细胞;TUNEL法分析AM630对囊壁内细胞凋亡的影响;Western blot法分析抑制大麻素受体CB2对ERK和PI3K/Akt信号通路的影响;免疫组织化学检测CB2、IL-1β、TNF-α、RANKL蛋白水平;荧光定量RT-PCR检测CB2、IL-1β、TNF-α、CPK、RANKL、RANK基因mRNA含量。【结果】标本大体观察发现,钛颗粒组植入骨片周围有红肿、渗出等明显的炎症变化,药物治疗后,炎症改变明显减轻;HE染色结果表明钛颗粒组air-pouch囊壁增厚,囊壁内大量巨噬细胞浸润;空白组及药物组囊壁较薄,囊壁内细胞少,多为成纤维细胞;形态计量学检测发现三组间囊壁厚度差异有统计学意义(F=101.74,P<0.05);VG染色光镜下可见空白组及药物组植入骨片边缘较光整,骨溶解现象不明显;钛颗粒组骨片边缘毛糙,有溶骨样改变;钛颗粒刺激后,植入骨片周围TRAP深染区域增多,AM630治疗后TRAP深染区域明显减少;TUNEL染色结果发现AM630治疗组囊壁内凋亡细胞显著增多;Western blot法检测发现AM630治疗后ERK、Akt磷酸化水平降低;免疫组织化学检测发现AM630能够降低钛颗粒引起的CB2、IL-1β、TNF-α和RANKL蛋白表达水平;定量RT-PCR结果表明钛颗粒刺激能够上调CB2、IL-1β、TNF-α、CPK、RANKL和RANK基因mRNA表达水平,AM630治疗14d后,上述基因表达水平显著降低,药物组和钛颗粒组差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】抑制大麻素受体CB2活性能降低磨损颗粒引起的炎症反应,抑制骨溶解。因此,大麻素受体CB2有望成为临床上治疗人工关节无菌性松动的新靶点。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
引言  10-12
第一部分钛颗粒诱导小鼠AIR-POUCH 骨溶解模型的建立和评价  12-24
  一、材料与方法  12-19
  二、结果  19-20
  三、讨论  20-22
  参考文献  22-24
第二部分大麻素受体C82 选择性抑制剂对磨损颗粒诱导假体周围骨溶解的影响  24-57
  一、材料与方法  24-32
  二、结果  32-34
  三、讨论  34-38
  参考文献  38-43
  结论  43-44
  附图  44-57
    第一部分附图  44-48
    第二部分附图  48-57
综述  57-67
中英文缩略词表对照  67-68
攻读学位期间公开发表的论文  68-69
致谢  69

大麻素受体CB2在钛颗粒诱导假体周围骨溶解中作用的实验研究

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