学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
小麦耐盐相关基因TaSI1、TaSC的功能研究
作 者: 侯晓梅
导 师: 黄占景;赵宝存
学 校: 河北师范大学
专 业: 遗传学
关键词: RNA干涉 过表达 农杆菌 遗传转化 半定量RT-PCR 转录本 定量PCR
分类号: Q943
类 型: 硕士论文
年 份: 2008年
下 载: 23次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
我们前面的工作已经证明TaSI1和TaSC基因是受盐诱导表达的,且通过异源转化实验证明这两个基因能够提高拟南芥的耐盐性。其中TaSI1是通过双向电泳的方法获得的,在耐盐材料RH8706-49和敏盐材料RH8706-34中盐诱导后表达均上调的基因。TaSC基因是通过cDNA-AFLP得到G09-94号差异cDNA序列的基础上,通过EST比对进行电子克隆得到的。由于水稻与小麦的进化关系更接近,本实验通过在水稻中分别过表达这两个基因,进一步研究了其耐盐性。选用pTCK303作为实施过表达的双元载体,分别构建了pTCK303-TaSI1、pTCK303-TaSC过表达载体,并进一步转化水稻。我们知道同源基因在生物体内所发挥的功能基本上是相同的,因此我们通过在NCBI网站进行同源比对分别找到了小麦TaSI1和TaSC基因的同源基因,并分别命名为OsSI和OsSC。在实验中进一步通过RNAi的手段研究水稻中这两个基因的功能,从另一方面证明TaSI1和TaSC基因的耐盐性。我们选用pTCK303作为实施RNAi策略的双元载体。在OsSI和OsSC基因中选取特异的一段cDNA作为RNA干涉的片段,分别命名为OsSIi和OsSCi,测序正确后分两次酶切连接,将RNAi片段先正向后反向两次连入pTCK303质粒中,完成pTCK303-OsSIi、pTCK303-OsSCi的构建。构建完成的双元载体通过农杆菌介导的方法转化水稻,经共培养、选择培养、分化培养后得到T0代转基因植株。得到的转基因株系如下:pTCK303-OsSIi为27个、pTCK303-TaS11为20个、pCAMBIA1300 ProTaSI1::GUS为11个, pTCK303-OsSCi为14个、pTCK303-TaSC为19个、pTCK303空载体为4个。我们通过Real time-PCR方法检测了OsSI和OsSC基因RNA干涉株系的转录本,其中OsSI基因的两个转基因株系line i-3、i-4分别下降了50%、70%;OsSC基因的三个转基因株系line i-1、i-2、i-20分别下降了20%、25%、50%、,说明RNA干涉实验成功。同时通过半定量RT-PCR检测了TaSI1和TaSC基因过表达植株的转录本,其中TaSI1基因的四个转基因株系OX-1、OX-2、OX-5、OX-9 mRNA量均显著上升;TaSC基因OX-10 mRNA量上升明显,但OX-1、OX-2两个转基因株系虽然也表达了TaSC基因,但mRNA量上升幅度不大。进而对转基因植株的T1代进行了耐盐性分析,TaSI1基因三个过表达植株OX-2、OX-5、OX-9比对照长势好,且存活率比空载体高20%左右,这与前面所检测的过表达植株的mRNA量的结果是一致的;TaSC基因三个过表达植株中OX-1、OX-2二个株系与对照长势并没有明显的差异,且存活率与空载体相似,OX-10存活率则比对照高不到20%,这与前面所检测的过表达植株的mRNA量的结果也是一致的。同时对OsSI和OsSC基因RNAi植株的T1代进行了耐盐性分析,结果表明OsSI RNAi的两个株系i-3和i-4长势明显不如对照,且存活率低于对照;OsSC基因RNAi的三个株系i-1、i-2、i-20存活率明显低于对照,两个基因的表型与mRNA的表达程度也是一致的。同时通过对TaSI1基因进行组织化学定位分析表明,该基因在愈伤、茎、茎节、叶舌、雄蕊、芽中均有表达,在根和叶中不表达。
|
全文目录
摘要 3-5 Abstract 5-9 引言 9-11 第一篇 文献综述 11-25 1 植物耐盐性的研究进展 11-13 1.1 盐胁迫对植物体的伤害 11 1.2 植物耐盐机理 11-13 2 水稻遗传转化研究 13-16 2.1 水稻遗传转化方法的研究 13-15 2.2 根癌农杆菌介导的水稻的遗传转化 15-16 3 植物遗传转化中出现的问题及对策 16-20 3.1 组织培养中的体细胞变异 16 3.2 转基因沉默 16-20 4 RNAi 技术 20-25 4.1 RNAi 现象的发现 20-21 4.2 RNAi 的作用机制 21-23 4.3 RNAi 在植物中的应用 23-25 第二篇 研究论文 25-60 第一章 小麦耐盐基因TaSI1的功能研究 25-46 1 实验材料、试剂及设备 25 2 实验方法 25-35 3 实验结果 35-46 第二章 小麦耐盐基因TaSC 的功能研究 46-56 1 实验材料、试剂及设备及方法(同前) 46 2 实验结果 46-56 讨论 56-59 结论 59-60 参考文献 60-65 附录 65-69 缩写表 69-70 致谢 70
|
相似论文
- 草菇采后生理生化及保鲜方法的研究,S646.13
- 利用RNAi提高烟草对病毒的抗性及岷江百合遗传转化体系的初步构建,S435.72
- rd29A驱动RdreBlBI基因转化‘红颊’草莓的研究,S668.4
- 微生物有机肥防治土传棉花黄萎病的效果及对根际微生物影响,S144.1
- 一个油菜菌核病抗病相关基因的功能初步分析,S435.654
- 新疆紫草细胞的稀土生物学效应及遗传转化,S567.239
- 鸭ADSL与PurH基因序列特征及表达与肌肉肌苷酸(IMP)含量的相关性分析,S834
- 大白菜霜霉菌诱导抑制性消减cDNA文库的构建及防御相关基因的表达分析,S436.341
- 大豆细菌性斑点病原物的分离鉴定及其两个Ⅲ型效应因子的克隆与功能研究,S435.651
- 烟夜蛾气味受体基因和精氨酸激酶基因的克隆与表达分析,S433.4
- 棉铃虫与烟夜蛾寄主选择机制的比较研究,S435.622.3
- 新疆小麦1Dx5基因的分离克隆及表达载体构建,S512.1
- 小麦苗期磷胁迫诱导紫色酸性磷酸酶基因和转录因子基因cDNA片段的克隆与分析,S512.1
- 农杆菌介导GmWRKY21基因转化大豆的研究,S565.1
- 玉米光周期敏感基因ZmELF4的克隆及功能验证,S513
- 野生种马铃薯蛋白酶抑制剂基因CYS和API的克隆及SpCYS转化马铃薯和烟草的初步研究,S532
- 小麦遗传转化体系建立和优化及抗坏血酸过氧化物酶基因(Ta-APX)转化小麦研究,S512.1
- 蝴蝶兰花序分生组织基因LFY表达载体构建及对蝴蝶兰的遗传转化,S682.31
- 苹果Ca2+/H+反向转运体活性及其基因表达特性研究,S661.1
- 切花菊转DdICE1基因研究,S682.11
- 切花菊蚜虫抗性鉴定与机理探讨及LLA转基因研究,S682.11
中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学
© 2012 www.xueweilunwen.com
|