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猪瘟兔化弱毒疫苗国家标准品的初步研究与建立

作 者: 李晶
导 师: 刘力;王在时
学 校: 西南大学
专 业: 预防兽医学
关键词: 猪瘟兔化弱毒疫苗 国家标准品 荧光定量RT-PCR
分类号: S852.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 21次
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内容摘要


猪瘟(Classical swine fever Vvirus,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须上报动物传染病。目前,我国猪瘟的爆发仍是猪发病最多、危害最大、流行最广的传染病。目前预防及治疗这类传染病,猪瘟疫苗还是兽医工作者的首选。为了确保猪瘟疫苗生产质量稳定、有效和可控,我国急需研制、发放和应用猪瘟兔化弱毒疫苗国家标准品。猪瘟兔化弱毒疫苗国家标准品是以检验合格的猪瘟兔化弱毒疫苗为候选物经过筛选、分析、测定出其标准的特性值,研制出用于对我国猪瘟疫苗质量进行校准、比对和控制的国家级标准物质。本研究初步建立了筛选方法,筛选出了一批疫苗候选物,并确定了猪瘟疫苗国家标准品的相关特性值,在进行多方协作标定后即将投入使用,这样既可以加强国内猪瘟疫苗质量的控制,提高防控猪瘟的产品质量,又能与国际标准接轨,并填补我国缺少猪瘟疫苗国家标准品的空白。本研究从原材料、半成品开始严格按照兽用生物制品规程要求把关,经厂家检验合格后进行候选物的筛选,对候选物确定标准品特性值的同时研制应用了新的含量定值方法,并将新方法与传统方法进行对比,共同定值并相互佐证。本研究对候选物采用了物理性状、装量测定、水分测定、效力检验、含量检验等8个特性值的赋值,利用“多点定值”确定了候选物的取舍后进行多方协作标定,系统地建立了国家标准品研制的程序。本次试验将TaqMan荧光定量RT-PCR方法引入国家疫苗标准品的研制中,与传统方法对比完善了国家标准品的制备。结果表明,该方法灵敏度可达到69个拷贝/μL,检测的线性范围为10~2-10~7。利用此方法对猪瘟国家标准品候选物检测阳性率达到100%,Ct值较稳定,均匀性较好。应用本研究对两批候选物(83081225、2009011)进行了初步筛选,结果显示2009011批次候选物物理性状为淡红色海绵状疏松团块,易与瓶壁脱离,加稀释液后迅速溶解;装量测定为重量均在0.16~0.19g之间,平均数为0.1792g:CV为2.00%;水分测定结果为水分剩余量均≤4%;效力检验的结果为该批候选物效力滴度可达到1/450倍稀释;含量洲定的结果均在8.35×10~5拷贝数/mL以上,该批次符合国家标准品的研制要求,可以作为候选物进行多方协作标定。同时应用过程中结果显示,新方法和传统方法可以相互配合完成候选物的筛选。本研究既可以完成国家标准品的研制,又可以规范疫苗生产,同时在研制中建立的新方法还可以辅助传统的兔体定型热反应应用于猪瘟疫苗效价的评估,猪瘟病毒致病机理以及标准品的使用研究。

全文目录


摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
第1章 猪瘟兔化弱毒疫苗国家标准物质的概述  11-20
  1.1 猪瘟病毒及猪瘟疫苗  11-14
  1.2 猪瘟兔化弱毒疫苗标准物质  14-17
  1.3 荧光定量RT-PCR技术在猪瘟兔化弱毒疫苗中的应用  17-20
第2章 猪瘟兔化弱毒疫苗国家标准品研制方法的建立  20-34
  2.1 引言  20
  2.2 猪瘟兔化弱毒疫苗国家标准品材料的筛选  20-22
  2.3 猪瘟兔化弱毒疫苗国家标准品候选物特性值赋值方法的摸索  22-26
  2.4 初步建立标准品——猪瘟兔化弱毒疫苗候选物赋值结果  26-32
  2.5 讨论  32-34
第3章 猪瘟兔化弱毒疫苗国家标准品的正式研制  34-42
  3.1 引言  34
  3.2 材料与方法  34-35
  3.3 猪瘟兔化弱毒疫苗国家标准品候选物小样(83081225)筛选结果  35-37
  3.4 猪瘟兔化弱毒疫苗国家标准品候选物小样(2009011)筛选结果  37-40
  3.5 对筛选合格的候选物大样冻干、协作标定  40
  3.6 讨论  40-42
论文总结及创新点  42-43
参考文献  43-49
附录  49-50
致谢  50

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 兽医基础科学 > 血清学
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