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棉酚对Jurkat T细胞和小鼠淋巴细胞的免疫药理作用及其机制研究

作　者: 许文彬
导　师: 何贤辉
学　校: 暨南大学
专　业: 免疫学
关键词: 棉酚 Jurkat T细胞细胞增殖细胞凋亡淋巴细胞
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:通过分析棉酚对Jurkat T细胞和小鼠淋巴细胞增殖和凋亡作用的影响,以及对二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(delaytype hypersensitivity,DTH)的免疫药理效应,探讨棉酚免疫抑制作用的机制。方法:1.将不同浓度的棉酚作用于Jurkat T细胞,用MTS比色法检测细胞存活率;以AnnexinV-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察核形态;用荧光染料Mitocapture结合流式细胞术和激光共焦显微镜检测线粒体跨膜电位变化。2.分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;用免疫染色检测淋巴细胞活化和淋巴母细胞转化情况;以Annexin V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察细胞核形态。3.采用0.5%DNFB腹部致敏,耳廓激发的方法建立小鼠DTH模型。激发后48 h,分析棉酚对DTH模型小鼠耳组织肿胀、胸腺指数和脾脏指数的影响;光学显微镜下观察小鼠耳廓组织学变化;MTS法检测淋巴结淋巴细胞增殖情况。结果:1.棉酚对细胞的抑制作用与药物存在时间-剂量依赖关系;高浓度棉酚作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征;随着浓度增加细胞线粒体跨膜电位明显降低。2.结果显示,棉酚对PDB+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P＜0.01),且呈剂量依赖性。免疫染色结果显示棉酚能同时明显抑制B细胞和T细胞亚群淋巴母细胞的转化和聚集形成。凋亡率随着棉酚作用时间的延长而上升,存在时间和剂量依赖关系。3.结果显示棉酚(25 mg/kg/d)处理组与DTH组具有显著差异(P＜0.05),能明显抑制DNFB引起的炎症反应;耳廓局部组织学检测也表明,棉酚能够抑制DNFB诱导的DTH,明显减少淋巴细胞的浸润;棉酚能降低DTH小鼠胸腺指数和脾脏指数;棉酚处理组DTH小鼠淋巴结淋巴细胞的增殖受抑制(P＜0.05)。结论:1.研究表明棉酚能有效抑制Jurkat T细胞增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间-剂量依赖关系,其诱导凋亡的作用可能依赖于线粒体途径。2.棉酚能有效抑制小鼠淋巴细胞体外增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间和剂量依赖关系。3.棉酚可显著抑制DTH小鼠耳组织肿胀和淋巴细胞浸润程度。降低胸腺和脾脏指数,抑制淋巴细胞的增殖并诱导淋巴细胞凋亡可能是其作用机制之一。

全文目录

中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-22
  1.棉酚的物理和化学性质  11
  2.棉酚的药理作用  11-14
    2.1 抗生育作用  11-12
    2.2 抗肿瘤作用  12-13
    2.3 抗炎作用  13-14
    2.4 其它作用  14
  3.T细胞功能及体外活化和增殖的检测  14-16
  4.细胞凋亡及其检测  16-17
  5.迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)的机制  17
  6.本课题的研究目的和意义  17-18
  参考文献  18-22
第一部分棉酚对Jurkat T细胞增殖和凋亡作用的影响  22-35
  1.1 材料与方法  22-25
  1.2 方法  25-26
  1.3 结果  26-31
  1.4 讨论  31-33
  参考文献  33-35
第二部分棉酚对小鼠淋巴细胞的增殖和凋亡作用的影响  35-51
  2.1 材料与方法  35-37
  2.2 方法  37-39
  2.3 结果  39-47
  2.4 讨论  47-49
  参考文献  49-51
第三部分棉酚对DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应的影响  51-60
  3.1 材料与方法  51-52
  3.2 方法  52-54
  3.3 结果  54-57
  3.4 讨论  57-58
  参考文献  58-60
总结  60-61
附录  61-63
致谢  63

棉酚对Jurkat T细胞和小鼠淋巴细胞的免疫药理作用及其机制研究

内容摘要

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