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鼻咽癌辐射抗拒细胞株CNE-2R模型的构建及其化疗药物敏感性初步研究

作　者: 李明耀
导　师: 朱小东
学　校: 广西医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 鼻咽癌细胞株辐射抗拒线性二次模型细胞周期多药耐药细胞凋亡
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

【目的】通过对放疗相对敏感的鼻咽癌细胞系CNE-2进行辐射诱导建立稳定的辐射抗拒细胞模型,从而为研究辐射抗拒机制及辐射抗拒与多药耐药之间关系提供良好的对比模型。【方法】1、选取对X射线相对敏感的鼻咽癌细胞株CNE-2进行间歇性大剂量γ射线照射(每次4Gy,共15次,总量60Gy),每次照射后的细胞继续培养,待3-4周存活的细胞进入指数生长期后进行下一次照射,整个照射及培养过程历时12个月,最终得到的后代细胞命名为CNE-2R(CNE-2 radiation induction)。2、采用克隆形成实验及线性二次模型拟合CNE-2R和CNE-2细胞的剂量存活曲线并计算相关放射生物学参数,检测其辐射抗拒性。连续8天培养细胞,绘制CNE-2和CNE-2R细胞生长曲线。流式细胞技术检测CNE-2R及其亲本细胞CNE-2经单次照射后细胞周期的变化。3、两种细胞同时冻存三个月并传代10次后,重新进行集落形成实验拟合剂量存活曲线,检测其辐射抗拒稳定性。【结果】1、经大剂量间歇性照射得到的CNE-2R和其亲代细胞CNE-2的α/β值分别为3.947±0.314和22.333±4.786(P<0.05),SF2值分别为0.609±0.018和0.260±0.012(P<0.05)。2、CNE-2细胞的倍增时间为24.8h,CNE-2R为40.67h。CNE-2细胞周期分布为G0/G1期为59.4%±1.00,S期为29.1%±1.23,G2/M期为12.7%±0.80;CNE-2R细胞周期分布为G0/G1期为69.6%±1.96,S期为23.6%±1.91,G2期6.7%±0.78。CNE-2增值指数为40.6%,CNE-2R增值指数为30.4%。经4Gy照射后12hCNE-2细胞S期细胞明显增加(P<0.05),24h后G2/M期细胞明显增加(P<0.05),48h后基本恢复正常状态,CNE-2R细胞周期未随时间的变化而明显改变。3、两种细胞同时冻存3个月并继续传代10次后CNE-2R和CNE-2细胞的α/β值分别为4.049±1.122和21.637±1.203(P< 0. 05),SF2值分别为0.605±0.055和0.226±0.008(P<0.05)。【结论】1、与亲本CNE-2细胞相比较,经间歇性大剂量照射诱导得到的CNE-2R细胞α/β值明显变小,SF2值明显增大,显示出了明显的辐射抗拒性。2、细胞周期检测结果说明CNE-2R株处于增殖期的细胞比例较CNE-2少,其倍增时间长于CNE-2细胞株。经单次4Gy照射后CNE-2细胞株表现出了再分布现象,而照射对CNE-2R细胞的细胞周期分布影响很小。3、CNE-2R细胞株经过冻存3个月并继续传代10次后成功保持了其辐射抗拒性。【目的】研究鼻咽癌CNE-2R辐射抗拒与化疗药物敏感性之间的关系,探讨CNE-2细胞株大分割辐射诱导前后化疗药物敏感性的改变,验证是否产生多药耐药性。【方法】以前期实验诱导出的鼻咽癌辐射抗拒细胞株CNE-2R为实验组,以亲代细胞株CNE-2为对照组,应用MTT法检测两组细胞对顺铂、5-氟尿嘧啶、卡铂、紫杉醇、吉西他滨、阿霉素等药物的杀伤率,并求出半数抑制浓度,进而计算抗拒细胞株CNE-2R的相对耐药指数;以相同浓度的顺铂和5-氟尿嘧啶作用于两组细胞,处理48小时后,应用流式细胞仪技术检测其凋亡率。【结果】1)MTT法检测细胞杀伤结果:经间歇性大剂量放疗诱导出的鼻咽癌辐射抗拒细胞系CNE-2R对顺铂、5-氟尿嘧啶、卡铂、紫杉醇、吉西他滨、阿霉素的耐药指数分别为3.26±0.31、3.65±0.09、10.04±1.34、1.51±0.03、8.95±0.20、3.16±0.39,半数抑制浓度IC50较CNE-2细胞均有明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。2)顺铂或5-氟尿嘧啶诱导的细胞凋亡:正常培养48h的CNE-2和CNE-2R细胞凋亡率分别为5.827%±0.033和6.297%±0.045,差异无统计学意义。经10цg/ml 5-Fu处理48h后的CNE-2和CNE-2R细胞凋亡率分别为31.735%±2.529和16.18%±1.281,差异具有统计学意义(P<0.05)。经1цg/ml DDP处理48h后的CNE-2和CNE-2R细胞凋亡率分别为56.98%±3.738和36.897%±3.290,差异具有统计学意义(P<0.05)。【结论】本实验前期诱导出的辐射抗拒细胞株CNE-2R,在产生辐射抗拒性的同时,产生了多药耐药性。

全文目录

中英文缩写  6-9
中文摘要  9-13
英文摘要  13-21
前言  21-22
第一部分鼻咽癌辐射抗拒细胞株 CNE-2R 模型的构建及其生物学特性研究  22-43
  引言  22-23
  1 材料与方法  23-33
    1.1 材料  23-27
      1.1.1 主要试剂及配制  23-26
        1.1.1.1 试剂  23
        1.1.1.2 配制方法  23-26
      1.1.2 细胞株  26
      1.1.3 仪器  26-27
      1.1.4 器具  27
      1.1.5 器具处理  27
    1.2 方法  27-33
      1.2.1 细胞培养  27-29
      1.2.2 细胞照射方法  29
      1.2.3 细胞形态学观察  29
      1.2.4 克隆形成实验检测辐射抗拒性  29-30
      1.2.5 绘制细胞存活曲线  30-31
      1.2.6 检测两种细胞的细胞周期  31-32
      1.2.7 统计学方法  32-33
  2 结果  33-37
    2.1 细胞形态学观察  33
    2.2 集落形成试验验证两种细胞辐射敏感性  33-34
    2.3 细胞生长曲线的绘制  34
    2.4 流式细胞技术检测两种细胞经单次照射后的细胞周期改变  34-36
    2.5 冻存三个月并再次传代10 次后的辐射敏感性检测  36-37
  3 讨论  37-43
第二部分鼻咽癌 CNE-2R 细胞株化疗药物敏感性初步研究  43-53
  引言  43-44
  1 材料和方法  44-48
    1.1 材料  44-45
      1.1.1 细胞株  44
      1.1.2 主要试剂及配制  44-45
        1.1.2.1 试剂  44
        1.1.2.2 试剂配制方法  44-45
      1.1.3 仪器  45
      1.1.4 器具  45
      1.1.5 器具处理  45
    1.2 方法  45-47
      1.2.1 MTT 法检测细胞耐药性  45-46
      1.2.2 流式细胞技术检测细胞凋亡  46-47
    1.3 统计学分析  47-48
  2 结果  48-50
    2.1 MTT 法检测CNE-2 及CNE-2R 细胞对不同化疗药物的敏感性  48-49
    2.2 流式细胞仪检测CNE-2 及CNE-2R 细胞在DDP 及5-Fu 诱导下的凋亡指数  49-50
  3 讨论  50-53
全文小结  53-54
参考文献  54-64
附录  64-70
综述肿瘤放射抗拒与多药耐药性关系的研究进展  70-87
   参考文献  80-87
致谢  87

鼻咽癌辐射抗拒细胞株CNE-2R模型的构建及其化疗药物敏感性初步研究

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