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雌性大鼠骨髓干细胞离体从头合成雌二醇的研究

作　者: 卢夏英
导　师: 邹挺
学　校: 南昌大学
专　业: 生理学
关键词: 骨髓干细胞分化性激素生成细胞芳香化酶雌二醇
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 12次
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内容摘要

目的:研究雌性大鼠骨髓干细胞(female bone marrow stem cells, FBMSCs)在含10%胎牛血清的高糖DMEM离体培养条件下细胞形态的变化,检测能否分化为产生雌二醇(estradiol,E2)及表达芳香化酶(aromatase, P450arom)的性激素生成细胞,为卵巢早衰、老年人骨质疏松症等疾病的治疗提供新的可能途径。方法:全骨髓贴壁法分离成年雌性SD大鼠的骨髓干细胞,用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养增殖,传代至第3代,加或不加全反式视黄酸(all-trans retinoic acid, ATRA)诱导分化,分为对照组(不加ATRA)和ATRA组(加ATRA 10-5 mol/L),观察两组细胞的形态学变化;放射免疫法(radioimmunoassay, RIA)/酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测两组细胞培养液中E2、睾酮(testosterone, T)/雄烯二酮(androstenedione,ASD)的浓度;RT-PCR检测两组细胞中芳香化酶基因CYP19 mRNA的表达和FSHR mRNA的表达;免疫细胞化学检测两组细胞中芳香化酶蛋白的表达情况。结果:1.离体培养的第3代雌性大鼠骨髓干细胞,主要表现为大小均一、梭形的贴壁细胞。2. DMEM高糖培养基加胎牛血清培养第3代雌性大鼠骨髓干细胞,RT-PCR示对照组和ATRA组从培养第1天开始均表达合成雌二醇的关键酶芳香化酶CYP19 mRNA和颗粒细胞标志基因FSHR mRNA,免疫细胞化学示两组细胞从培养第2天到第4天都有芳香化酶蛋白的表达,阳性细胞呈簇状分布,形态呈多角形或梭形,细胞核呈卵圆形,染深蓝色。从培养1天开始在两组细胞培养液中都检测到较高水平的E2。3.对照组和ATRA组都能产生T和ASD,提示雌性大鼠骨髓干细胞在离体培养条件下能从头合成E2。结论:雌性大鼠骨髓干细胞在离体培养条件下能从头合成E2及表达芳香化酶,分化为性激素生成细胞。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
第1章引言  9-14
第2章材料和方法  14-20
  2.1 材料  14-16
    2.1.1 主要仪器设备  14
    2.1.2 主要试剂及配置方法  14-15
    2.1.3 动物  15-16
  2.2 方法  16-19
    2.2.1 FBMSCs 的分离和体外培养  16
    2.2.2 实验分组  16
    2.2.3 FBMSCs 培养液中 E2、T 和 ASD 浓度的检测  16-17
    2.2.4 RT-PCR 检测 FBMSCs 芳香化酶基因 CYP19 mRNA 和 FSHR mRNA 的表达  17-18
    2.2.5 免疫细胞化学检测 FBMSCs P450arom 的表达  18-19
  2.3 统计学方法  19-20
第3章结果  20-23
  3.1 分离培养的 FBMSCs 形态学观察  20
  3.2 对照组和 ATRA 组培养的第三代 FBMSCs 均能合成 E_2 和 T 、ASD  20-22
  3.3 对照组和 ATRA组 FBMSCs 可表达 CYP19 mRNA和 FSHR mRNA  22
  3.4 培养的FBMSCs可表达P450arom蛋白  22-23
第4章讨论  23-28
第5章结论  28-29
致谢  29-30
参考文献  30-34
附图  34-38
攻读学位期间的研究成果  38-39
附带综述  39-48

雌性大鼠骨髓干细胞离体从头合成雌二醇的研究

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