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两种泥鳅中CYP19基因的克隆及表达分析

作　者: 崔俊莉
导　师: 常重杰
学　校: 河南师范大学
专　业: 遗传学
关键词: 性别决定 芳香化酶 CYP19基因
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


芳香化酶(aromatase)基因的全称是细胞色素P450芳香化酶基因(cytochrome P450 aromatase),可缩写为P450arom或CYP19,芳香化酶是由CYP19基因编码,该酶是催化雄性激素合成雌性激素的限速酶及关键酶,对维持类固醇激素间的生理平衡具有重要作用,并对研究鱼类性别决定及分化机制有重要的参考意义。本文采用RT-PCR与RACE的方法,分别获得了4个CYP19基因片段。经测序和同源性分析发现,其中2个CYP19基因序列与斑马鱼CYP19a序列相似度达83%,另外两个与稀有鮈鲫的CYP19b序列相似度达84%,因此可认为所克隆的片段分别是CYP19a和CYP19b两种基因。根据命名法则命名为:MaCYP19a、PdCYP19a和MaCYP19b、PdCYP19b。用DNAMAN软件进行序列结果分析:MaCYP19a cDNA克隆片段大小为1815bp,含有503bp3’UTR,编码432个氨基酸残基;PdCYP19a cDNA克隆片段大小为1802bp,含有506bp3’UTR,编码430个氨基酸残基;MaCYP19b cDNA保守片段大小为428bp,编码142个氨基酸残基;PdCYP19b cDNA克隆片段大小为429bp,编码142个氨基酸残基。用MEGA4.0软件对15个物种的CYP19基因进行聚类分析,这两种泥鳅的CYP19基因分属于两个分支,即脑芳香化酶基因和性腺芳香化酶基因,CYP19基因与斑马鱼、鲤鱼的同源性最高,说明芳香化酶基因在进化上相对保守。以GAPDH为参照,用半定量RT-PCR和荧光实时定量RT-PCR两种方法研究两种泥鳅中CYP19在成体不同组织和胚胎不同发育时期的特异性表达,得出CYP19基因在脑和性腺的表达活性最高,在胚胎不同时期CYP19a和CYP19b基因表达差异较大。

全文目录


摘要  4-5ABSTRACT  5-81 引言  8-32  1.1 性别决定机制的研究历史  9-10  1.2 生物界性别决定机制的多样性、复杂性  10-18    1.2.1 遗传型性别决定  10-12    1.2.2 环境依赖型性别决定  12-18  1.3 鱼类的性别决定及其性别分化机制  18-26    1.3.1 鱼类中性别决定的类型  18-24    1.3.2 性别决定及分化的分子机理  24-25    1.3.3 鱼类性腺的周年发育过程  25-26  1.4 芳香化酶与鱼类性别决定及分化的关系  26-27    1.4.1 芳香化酶基因（CYP19 基因）的特点  26    1.4.2 芳香化酶的生化性质及分布  26-27    1.4.3 芳香化酶对性别分化的影响及其活性调节  27    1.4.4 芳香化酶的分子克隆  27  1.5 3′RACE 和5′RACE 技术简介  27-29    1.5.1 3′RACE 的技术原理  28    1.5.2 5′RACE 的技术原理  28-29  1.6 本课题的研究意义  29-322 材料与方法  32-40  2.1 材料  32-35    2.1.1 实验动物  32    2.1.2 载体和宿主菌  32    2.1.3 引物  32-33    2.1.4 主要仪器设备  33-34    2.1.5 主要试剂  34    2.1.6 本课题常用试剂配方  34-35  2.2 实验方法  35-40    2.2.1 总RNA 的制备  35    2.2.2 两种CYP19 cDNA 序列的克隆、测序与分析  35-38    2.2.3 CYP19 基因的表达模式  38-403 结果  40-60  3.1 两种CYP19 基因cDNA 序列的克隆  40-42    3.1.1 总RNA 的提取  40    3.1.2 两种泥鳅中两种CYP19 基因保守区域的克隆  40-42    3.1.3 两种泥鳅中3’RACE CYP19 扩增结果  42  3.2 两种泥鳅中CYP19 基因的序列分析  42-46    3.2.1 两种泥鳅中CYP19a 序列分析  42-45    3.2.2 两种泥鳅中CYP19b 序列分析  45-46  3.3 两种泥鳅中CYP19 基因与其他物种的同源性分析  46-54    3.3.1 两种泥鳅中CYP19a 序列同源性分析  46-50    3.3.2 两种泥鳅中CYP19b 序列同源性分析  50-53    3.3.3 两种泥鳅中CYP19 基因系统进化分析  53-54  3.4 两种CYP19 基因表达模式的分析  54-60    3.4.1 CYP19 基因六种成体组织中表达模式分析  55-56    3.4.2 两种CYP19 基因在胚胎发育五个时期中表达模式分析  56-604 讨论  60-66  4.1 序列分析  60-62    4.1.1 两种泥鳅中CYP19 基因的存在形式  60-61    4.1.2 芳香化酶保守区分析  61-62  4.2 两种泥鳅中 CYP19 基因的表达模式分析及功能预测  62-64    4.2.1 两种泥鳅中 CYP19 基因在成体不同组织中的特异性表达  63-64    4.2.2 两种泥鳅中CYP19 基因在胚胎不同发育时期的特异性表达  64  4.3 RACE 技术的注意事项  64-65  4.4 结语与展望  65-66参考文献  66-74致谢  74-76攻读硕士学位期间发表的学术论文目录  76-77

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产基础科学 > 水产生物学 > 水产动物学
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