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Livin mRNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞株HepG-2体外增殖及凋亡的影响

作　者: 王春霞
导　师: 杨林西
学　校: 兰州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 自由能反义核酸 livin HepG-2 细胞增殖凋亡
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 24次
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内容摘要

目的:观察结合于Livin mRNA的BIR结构域上的反义寡核苷酸(antisenseoligodexynucleotide,ASODN)对Livin基因的抑制效应,及对人类肝癌细胞株HepG-2体外增殖和凋亡的影响。期望观察到理想的抑瘤效果,为针对Livin基因的反义治疗策略及临床抗肿瘤药物开发提供新的思路。方法:从genbank上查得livin mRNA的序列,并找出其中的BIR结构域,基于最小自由能原理算法分析出livin mRNA上的低结合自由能区域,并针对这一区域合成反义寡核苷酸ASODN及其对照组错义寡核苷酸(missenseoligodexynucleotide,MSODN),其中反义链(Antisense strand)是与Livin mRNA的BIR结构域20个碱基序列互补的反义寡核苷酸片段,错义链(Missensestrand)与Livin mRNA无配对关系,且不与任何人类已知基因互补。根据作用药物不同,实验可分为ASODN组(处理药物为ASODN)、MSODN组(处理药物为MSODN)和对照组(处理药物为无抗生素无血清的DMEM培养基)。上述药物作用于人肝癌细胞株HepG-2,采用MTT法检测Livin ASODN对HepG-2细胞的增殖抑制作用,倒置显微镜、透射电子显微镜、HE染色、瑞式-姬姆萨染色、流式细胞仪(FCM)以及吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)细胞染色法检测细胞形态学改变和细胞凋亡水平;AMV一步法RT-PCR检测livin mRNA水平;免疫细胞化学方法检测livin蛋白表达水平。结果:1.HepG-2细胞增殖受抑,且抑制效应与寡核苷酸浓度、作用时间呈量效及时效关系。2.livin mRNA及蛋白表达水平下降,细胞出现凋亡。结论:1.ASODN能抑制livin基因的表达,在体外能抑制肝癌细胞增殖。2.对于较短的mRNA,利用最小自由能原理对其设计反义核酸是一种可以信赖的方法,以此方法设计的ASODN在体外对livin基因表现出了较为高效的抑制作用。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
前言  9-22
材料和方法  22-35
结果  35-47
讨论  47-53
结论  53-54
参考文献  54-61
缩略词表  61-63
致谢  63

Livin mRNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞株HepG-2体外增殖及凋亡的影响

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