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BRSK2与Mnk1a的相互作用研究
作 者: 罗挺
导 师: 余龙
学 校: 复旦大学
专 业: 遗传学
关键词: BRSK2 Mnkla GST pull-down 细胞定位 磷酸化 神经生长因子
分类号: Q75
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 35次
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内容摘要
BRSK2(Brain Selective Kinase 2)是我们实验室克隆的一个在胰腺和脑组织特异高表达的基因。根据BRSK2激酶结构域的氨基酸序列将其归类于CAMK激酶家族的AMPK亚家族。LKB1(又名STK11,即丝氨酸-苏氨酸激酶11)能够磷酸化激活包括BRSK2在内的AMPK激酶亚家族的13个成员。组织表达谱分析表明BRSK2在脑和胰腺组织中呈现特异性的高表达,并且胰腺组织中的表达丰度比脑组织中的表达丰度高。以往的研究表明,BRSK2在神经元细胞极化、神经递质释放的突触前调节等过程中发挥重要功能。我们实验室前期的研究发现BRSK2也在参与肿瘤细胞能量压力调节,增强肿瘤细胞抵抗能量饥饿等过程中发挥重要作用。Mnk1a(MAPK-interacting kinase 1a)是受丝裂原活化蛋白激酶MAPK激活的苏氨酸/丝氨酸激酶,它既可被生长因子激活的ERK磷酸化激活,又可被应急激活的p38磷酸化激活,具有整合不同MAPK信号的作用。大量的研究已经证实Mnk1a能够磷酸化下游的真核翻译起始因子eIF4E 209位丝氨酸,从而调控mRNA 5’甲基鸟苷帽子结构依赖的蛋白翻译过程。近年来的细胞肿瘤学研究表明,Mnk1a在许多肿瘤细胞中上调,并通过磷酸化下游的原癌基因eIF4E,上调若干原癌基因,例如CyclinD和VEGF的转录,增强肿瘤细胞抗凋亡能力,促进癌细胞恶性增殖。本研究在实验室前期酵母双杂交筛选工作取得互作结果的基础上,继续深入研究BRSK2与Mnk1a的相互作用及其功能意义。我们首先用近年来广泛报道的能够激活ERK激酶,促进胰腺癌细胞浸润、抗凋亡、存活的神经生长因子NGF来刺激PANC-1细胞,发现NGF能够上调PANC-1细胞内的BRSK2 mRNA和蛋白水平,促进肿瘤细胞在能量饥饿压力下的存活,其次我们利用GSTpull-down蛋白相互作用的方法,证实BRSK2能够在体外与Mnk1a实现互作,并体外磷酸化Mnk1a,免疫荧光共定位证明BRSK2与Mnk1a在细胞核周富集,存在显著的共定位。这些实验结果的取得,为深入研究BRSK2基因的功能、尤其是在胰腺癌细胞内的生理意义进行了有益的初步探索。
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全文目录
英文缩写词 5-6 中文摘要 6-7 英文摘要 7-8 前言 8-10 材料和方法 10-23 一.材料 10-16 二.主要的仪器设备 16 三.计算机分析软件 16-17 四.实验方法 17-23 结果 23-29 一.能量压力下,神经生长因子NGF上调BRSK2,促进PANC-1细胞的存活 23-24 二.Mnk1a原核表达、纯化 24-25 三.BRSK2与Mnk1a的GST Pull-Down蛋白相互作用 25 四.BRSK2体外磷酸化Mnk1a 25-26 五.BRSK2与Mnk1a在Hela细胞核周共定位 26-29 讨论 29-30 小结 30-31 参考文献 31-38 文献综述 38-47 致谢 47-48
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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 分子遗传学
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