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siRNA沉默HIF-1α基因对人前列腺癌PC3细胞生物学性状的影响

作　者: 付振宇
导　师: 严春寅
学　校: 苏州大学
专　业: 泌尿外科
关键词: 前列腺癌 PC3细胞缺氧诱导因子-1α RNA干扰生物学性状
分类号: R737.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的使用siRNA干扰人前列腺癌 PC3细胞HIF-1α的基因表达,观察HIF-1α基因沉默后PC3细胞包括生长增殖、迁移力、侵袭力、凋亡及VEGF、GLUT-1蛋白水平等细胞生物学行为。方法使用经过筛选证实的HIF-1αsiRNA序列和阴性对照NC siRNA序列,采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000转染PC3细胞;实验分为PC3组、PC3+NC siRNA组和PC3+HIF-lαsiRNA组;用CCK-8法测三组细胞生长增殖情况;划痕试验法观察三组细胞迁移能力;Transwell法观察三组细胞侵袭力;流式细胞仪测量三组细胞凋亡率;ELISA方法检测三组细胞VEGF、GLUT-1蛋白含量,并对其各结果行统计学分析。结果①.CCK-8法检测转染后0h、12h、24h、48h、72h、96h三组细胞增殖水平,根据测得的OD值比较各组细胞的生存情况,发现在24h、48h、72h、96h时PC3+HIF-lαsiRNA组细胞存活数较两对组差异均具有统计学意义(P<0.05),但48h时HIF-lα干扰作用最明显(F=53.77,P<0.01);②.划痕法测转染后三组细胞迁移力,结果显示:PC3+HIF-lαsiRNA组细胞有一定迁移,但迁移速度较慢;PC3组细胞迁移速度明显较快,PC3+HIF-lαsiRNA组较PC3组和PC3+NC siRNA组差异有统计学意义(F=134.02,P<0.01);PC3+NCsiRNA组和PC3组细胞迁移情况相似(P>0.05);③. Transwell法测转染后三组细胞侵袭力,结果显示:PC3+HIF-lαsiRNA组穿过Matrigel胶的细胞数明显少于PC3组和PC3+NC siRNA组(F=28.00,P<0.01),而PC3组和PC3+NCsiRNA组之间无明显差别(P>0.05);④.流式细胞仪技术测转染后48h三组细胞凋亡率,结果显示:PC3+HIF-lαsiRNA组细胞凋亡率为(11.2±1.13)%,PC3组和PC3+NC siRNA组细胞凋亡率分别为(2.4±0.26)%和(2.5±0.36)%,PC3+HIF-lαsiRNA组较PC3组和PC3+NC siRNA组细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(F=150.14,P<0.01),而PC3组和PC3+NC siRNA组细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);⑤. ELISA方法检测转染后48h细胞VEGF、GLUT-1蛋白水平,比较其OD值,结果显示:PC3+HIF-lαsiRNA组较PC3组和PC3+NCsiRNA组VEGF、GLUT-1蛋白表达明显下降(FVEGF=277.50,PVEGF<0.01 ; F GLUT-1=691.41, P GLUT-1<0.01),而PC3组和PC3+NCsiRNA组VEGF、GLUT-1蛋白表达无明显差异(PVEGF>0.05;P GLUT-1>0.05);结论①.沉默HIF-1α基因能有效抑制人前列腺癌PC3细胞的生长,发挥抗肿瘤作用;②.沉默HIF-1α基因能抑制人前列腺癌PC3细胞的迁移力和侵袭力,降低肿瘤的恶性潜能;③.沉默HIF-1α基因能诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用;④.沉默HIF-1α基因对人前列腺癌PC3细胞VEGF、GLUT-1基因具有负性调控作用;

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-10
引言  10-13
材料与方法  13-22
结果  22-28
讨论  28-37
结论  37-38
参考文献  38-44
综述  44-58
中英文对照缩略词表  58-59
攻读学位期间公开发表的论文  59-60
致谢  60-61

siRNA沉默HIF-1α基因对人前列腺癌PC3细胞生物学性状的影响

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