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阿托伐他汀对衰老的血管内皮细胞自噬作用的影响及研究

作　者: 郭睿蓉
导　师: 肖传实
学　校: 山西医科大学
专　业: 心血管内科
关键词: 阿托伐他汀血管内皮细胞衰老自噬雷帕霉素
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

第一部分人脐静脉内皮细胞衰老模型的建立及鉴定目的：为研究阿托伐他汀对衰老的血管内皮细胞自噬作用的影响,我们通过AngⅡ干预人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立血管内皮细胞衰老的的模型。方法：无菌培养HUVECs,选择生长状况良好的细胞用于实验。实验分为：(1)对照组：不加干预因素；(2)加入1×10-5mol/L的AngⅡ;(3)加入1×10-6mol/L的AngⅡ;(4)加入1×10-7mol/L的AngⅡ。干预48小时后收集细胞,衰老p—半乳糖苷酶染色及细胞周期鉴定细胞衰老情况。结果：1.流式细胞术分析细胞周期显示：与对照组相比,随着AngⅡ浓度的升高,G0/G1期细胞百分率逐渐增多,S期细胞百分率逐渐减少,G2期无明显差异。与对照组相比,10-7mmol/L AngⅡ组无明显差异,10-6和10-5mmol/L AngⅡ组有统计学差异(P<0.05)。2.衰老相关β-gal染色结果显示：与对照组相比,随着AngⅡ浓度的升高,衰老细胞β-gal染色阳性率明显升高,有统计学差异(P<o.05),提示加入AngⅡ可增强内皮细胞β-gal的活性。结论：AngⅡ可诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老。第二部分阿托伐他汀对血管内皮细胞衰老和自噬的影响目的：探讨阿托伐他汀对人脐静脉内皮细胞衰老和自噬的影响及可能的信号通路。方法：实验分组：1)对照组：不加干预因素；(2)AngⅡ组：只加入1×10-6mol/L的AngⅡ;(3)AngⅡ+阿托伐他汀组：加入1×10-6mol/L的阿托伐他汀1h后加入1×10-6mol/LAngⅡ;(4) AngⅡ+阿托伐他汀+Rapa组：加入1×10-6mol/L的阿托伐他汀及10-7mol/L的雷帕霉素1h后再加入1×10-6mol/L AngⅡ。每组设3个复空(n=3),实验重复3次。干预48小时后收集细胞。衰老β—半乳糖苷酶染色及细胞周期鉴定细胞衰老情况,Western Blot技术检测自噬相关蛋白LC3和Beclinl的表达。结果：1.流式细胞术示细胞周期：与AngⅡ组相比,AngⅡ+阿托伐他汀组表现为G1期减少和S期的增加；AngⅡ+阿托伐他汀+Rapa组与AngⅡ+阿托伐他汀组相比,处于Go/G1细胞增加,处于S期的细胞减少。2.衰老相关β-gal染色结果：与AngⅡ组相比,阿托伐他汀组表现为β—半乳糖苷酶染色阳性率明显减低(6.48±3.52) P<0.05; AngⅡ+阿托伐他汀+Rapa组与AngⅡ+(?)可托伐他汀组相比,β—半乳糖苷酶染色阳性细胞明显增多(13.27±2.67),P<0.05。3. Western blot检测线粒体自噬相关蛋白表达：与AngⅡ组相比,AngⅡ+阿托伐他汀组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值下降,Beclin1表达明显降低,有显著性差异(P<0.05)；与AngⅡ+阿托伐他汀组相比,Rapa组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值上调,Beclin1表达增加(P<0.05)。结论：阿托伐他汀可抑制AngⅡ致HUVECs衰老,其抑制作用可能与减少自噬有关,Akt/PKB可能是其中关键的信号通路。

全文目录

英文缩略词表  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-12
第一部分人脐静脉内皮细胞衰老模型的建立及鉴定  12-20
  材料与方法  12-17
  结果  17-18
  讨论  18-20
第二部分阿托伐他汀对血管内皮细胞衰老和自噬的影响  20-33
  材料与方法  20-28
  结果  28-30
  讨论  30-33
结论  33-34
附图  34-41
参考文献  41-45
综述  45-51
  参考文献  49-51
致谢  51-52
个人简介  52

阿托伐他汀对衰老的血管内皮细胞自噬作用的影响及研究

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