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藁本内酯对抗D-半乳糖和过氧化氢致氧化应激损伤的神经保护作用
作 者: 李洁佳
导 师: 钱忠明;朱俐
学 校: 南通大学
专 业: 航空、航天与航海医学
关键词: 藁本内酯 衰老 氧化应激 认知功能障碍 人神经母细胞瘤细胞 凋亡
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要
目的探讨藁本内酯( Z-ligustilide , Lig )对D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的拟衰老小鼠的神经保护作用,并从氧化应激角度探讨其作用机制。方法用D-gal(150mg/kg)对ICR小鼠进行颈背部皮下注射8周,每日一次,造成亚急性衰老模型。造模同时,以维生素E为阳性对照药物,分别给予相应浓度的藁本内酯(80mg/kg)和维生素E(100mg/kg),对照组和D-gal组给予相同容积的0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。采用Morris水迷宫和Y-电迷宫检测小鼠空间学习记忆能力;化学比色法测定皮质中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Na+-K+-ATPase活力;免疫荧光化学观察小鼠皮质及海马中微管相关蛋白2(microtubule associated protein 2,MAP-2)、生长相关蛋白43(growth associated protein 43,GAP-43)、胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)的表达。选取人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)以过氧化氢(hydrogen peroxide, H2O2)处理导致氧化应激,加入藁本内酯预处理后,再与H2O2孵育,MTT检测细胞活性,Hoechst 33342荧光染色观察细胞凋亡的发生,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析与凋亡相关的Bcl-2,Bax,Caspase-3蛋白表达情况。结果给予D-gal 8周后,Morris水迷宫检测显示D-gal小鼠到达平台的潜伏期明显延长,到达平台所经过的路程显著增加,藁本内酯和维生素E均可缩短潜伏期及减少到达平台的路程。Y-电迷宫检测显示D-gal小鼠在训练的第2、3天的正确反应率均明显低于对照组(P<0.05),给予藁本内酯和维生素E均能显著提高正确反应率。生化检测指标显示,D-gal小鼠皮质中MDA含量增高, Na+-K+-ATPase活力降低,藁本内酯和维生素E均能降低小鼠皮质中MDA含量,显著提高Na+-K+-ATPase活力。免疫荧光化学检测显示,D-gal小鼠皮质及海马中生长相关蛋白GAP-43表达减少,树突标记物MAP-2表达减少,树突排列紊乱,GFAP表达显著增加,Caspase-3被激活,给予藁本内酯或维生素E可显著减少大脑中Caspase-3的激活,提高GAP-43、MAP-2的表达,降低GFAP的表达。在离体实验中,SH-SY5Y细胞经100?M H2O2处理4h后,细胞活力下降约50%,Hoechst33342荧光染色可见较多细胞皱缩、核浓染和碎裂,呈现凋亡的形态学特征,Bcl-2表达下降, Bax及Caspase-3表达升高;经过8?M藁本内酯预处理1h后,再进行H2O2损伤,细胞活力呈剂量依赖性增加,凋亡细胞明显减少,Bcl-2表达上升,而Bax及Caspase-3表达下降。结论⑴成年小鼠长期低剂量注射D-gal后,空间学习、记忆能力减退,藁本内酯对D-gal诱导衰老小鼠的认知功能障碍有明显的改善作用;⑵藁本内酯可能通过减少膜脂质过氧化,抑制神经细胞凋亡,减少胶质细胞反应性增生来延缓衰老。
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全文目录
摘要 6-8ABSTRACT 8-10第一章 绪论 10-13第二章 材料与方法 13-28 2.1 材料 13-18 2.1.1 实验动物、细胞株 13 2.1.2 主要仪器 13-14 2.1.3 试剂及耗材信息 14-16 2.1.4 溶液配制 16-18 2.2 方法 18-28 2.2.1 动物造模 18-19 2.2.2 空间学习、记忆能力测试 19-20 2.2.3 组织匀浆 20-21 2.2.4 生化指标检测 21 2.2.5 动物灌注和冰冻切片 21 2.2.6 免疫组织化学 21-22 2.2.7 免疫荧光化学 22-23 2.2.8 SH-SY5Y 细胞培养、传代、冻存 23 2.2.9 SH-SY5Y 细胞处理 23-24 2.2.10 MTT 法检测细胞活力 24 2.2.11 Hoechst 33342 荧光染色检测细胞凋亡 24 2.2.12 全细胞裂解液的制备 24-25 2.2.13 蛋白质定量(BCA 试剂法) 25 2.2.14 蛋白质免疫印迹(Western blot) 25-27 2.2.15 数据处理和统计学分析 27-28第三章 结果 28-43 3.1 藁本内酯对 D-GAL 诱导衰老小鼠的影响 28-38 3.1.1 藁本内酯对衰老小鼠空间学习、记忆能力的影响 28-30 3.1.2 藁本内酯对衰老小鼠皮质中MDA含量及Na~+-K~+-ATPase活力的影响 30-32 3.1.3 藁本内酯对衰老小鼠皮质和海马中 MAP-2 表达的影响 32-33 3.1.4 藁本内酯对衰老小鼠皮质及海马中 GAP-43 表达的影响 33-35 3.1.5 藁本内酯对衰老小鼠不同脑区 GFAP 表达的影响 35-36 3.1.6 藁本内酯对衰老小鼠皮质及海马中 Caspase-3 表达的影响 36-38 3.2 藁本内酯对过氧化氢损伤的 SH-SY5Y 细胞的保护作用 38-43 3.2.1 藁本内酯对过氧化氢损伤的 SH-SY5Y 细胞活力的影响 38-39 3.2.2 藁本内酯对过氧化氢致凋亡的影响 39-41 3.2.3 藁本内酯对过氧化氢诱导的 SH-SY5Y 细胞凋亡蛋白表达的影响 41-43第四章 讨论 43-49第五章 结论 49-50参考文献 50-55英文缩写词表 55-57综述 57-70 综述参考文献 66-70在攻读硕士学位期间发表的论文、参加的学术会议及项目 70-71 A: 在国内外刊物上发表的论文 70 B: 在国际国内学术会议上发表的论文 70 C: 所参与的项目 70-71致谢 71
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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