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阿奇霉素诱导小鼠急性肝损伤模型的建立及其分子病理的研究

作　者: 石岩
导　师: 徐正顺
学　校: 河南科技大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 阿奇霉素急性肝损伤增殖凋亡炎症小鼠
分类号: R-332
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的建立阿奇霉素诱导的小鼠急性肝损伤模型并研究急性肝损伤过程中相关分子的动态变化，从而探讨其作用的可能机制。方法取小鼠300只，每100只为一组，共分三组，每组中有90只给予0.3%阿奇霉素溶液200mg.kg^-1、400mg.kg^-1、800mg.kg^-1腹腔注射，建立小鼠急性肝损伤模型，剩余10只为对照组，在注射阿奇霉素后0h、3h、6h、12h、24h、30h、36h、42h、48h和54h10个时间点取材，每个时间点取10只小鼠，利用赖氏法检测血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）的活性变化；同时利用HE染色的方法检测各时间点小鼠肝组织的病理变化；利用蛋白印迹的方法检测各时间点小鼠肝组织中PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP27、TNF-α、VEGF等分子的表达变化，用Gel Pro4.0软件计算蛋白相对表达值。结果与正常对照组小鼠相比较，200mg/kg阿奇霉素模型组小鼠血清ALT和AST活性变化不明显；400mg/kg阿奇霉素模型组其ALT、AST活性于12h明显升高，24h逐渐降低并于54h时恢复正常；800mg/kg阿奇霉素模型组其ALT、AST活性均呈显著升高（P<0.05），在24h可达高峰，于30h开始降低，54h时可恢复至正常。200、400mg/kg阿奇霉素注射后小鼠肝脏组织学变化不明显；800mg/kg阿奇霉素注射，肝受到一定损伤之后，小鼠的肝脏失去正常结构，组织病理学结果显示注射阿奇霉素后24h肝组织损伤最为严重，然后开始逐渐恢复，于54h可恢复至正常。阿奇霉素所诱导的小鼠急性肝损伤在3h，6h，12h，24h，30h，36h，42h，48h，54h之后肝PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP27、TNF-α、VEGF蛋白的表达均可出现显著的变化趋势（P<0.05）。PCNA在阿奇霉素诱导后6h至30h明显降低，36h时开始升高，42h又有所下降，随后又升高，54h又降低； Bcl-2在阿奇霉素诱导后明显降低，在6h时达最低点，然后于30h开始升高，到36h和42h其表达又降低；Bax在阿奇霉素诱导后3h到6h逐渐升高，在12h达到高峰，然后降低，并逐渐向正常水平恢复。HSP27在阿奇霉素诱导后3h到6h开始升高，然后降低，在30h降至最低，随后逐渐恢复至正常；HSP70在阿奇霉素诱导后3h至12h先升高，24h时降低，并逐渐恢复至正常; TNF-α在阿奇霉素诱导后先逐渐升高，30h达到高峰，然后又逐渐降低，TNF-α致细胞膜的通透性增加，从而大量分泌，但因其高度的表达，可加重肝的损伤程度，因而后期又有逐渐降低趋势；VEGF在阿奇霉素诱导后于24h逐渐升高，30h达最高，于36h开始下降，48h逐渐向正常水平恢复。结论1利用800mg/kg阿奇霉素注射小鼠成功建立小鼠急性肝损伤动物模型。2阿奇霉素诱导小鼠急性肝损伤后肝组织PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP27、TNF-α、VEGF蛋白的表达均出现显著的变化，这7种分子在此过程中可能起到重要作用。

全文目录

摘要  2-4
ABSTRACT  4-8
第1章综述  8-14
  1.1 引言  8
  1.2 药物性肝损伤的病理生理  8-9
  1.3 常见的药物性肝损伤模型  9-11
    1.3.1 四氯化碳（CCl4）性肝损伤  9-10
    1.3.2 D-氨基半乳糖性肝损伤(D-galactosanine, D-GalN)  10
    1.3.3 对乙酰氨基酚肝损伤  10-11
  1.4 其它类型的肝损伤模型  11-13
    1.4.1 刀豆蛋白 A 诱导法  11-12
    1.4.2 卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)诱导法  12
    1.4.3 酒精性肝损伤  12-13
  1.5 总结和展望  13-14
第2章前言  14-18
第3章材料与方法  18-24
  3.1 实验材料  18
  3.2 主要仪器  18
  3.3 主要试剂及配置  18-20
  3.4 实验具体操作方法及分组  20-22
    3.4.1 实验组的设计  20
    3.4.2 阿奇霉素诱导小鼠急性肝损伤模型的建立  20
    3.4.3 监测血清 ALT 和 AST  20
    3.4.4 常规苏木素伊红 HE 染色  20-21
    3.4.5 测定相关蛋白  21-22
  3.5 统计方法  22-24
第4章结果  24-26
  4.1 血清 ALT 和 AST 活性检测  24
  4.2 观察肝脏的组织病理学  24
  4.3 检测有关的蛋白  24-26
    4.3.1 肝脏 PCNA 蛋白的表达  24
    4.3.2 肝脏凋亡蛋白 Bcl-2 和 Bax 的两种表达  24-25
    4.3.3 肝脏 HSP27、HSP70 两者蛋白的表达  25
    4.3.4 肝脏 TNF-α蛋白的表达  25
    4.3.5 肝脏 VEGF 蛋白的表达  25-26
第5章讨论  26-30
  5.1 受损后的血清酶变化  26
  5.2 肝脏组织受损后的病理学变化  26
  5.3 肝细胞受损后的增殖变化  26-27
  5.4 肝细胞受损后的凋亡变化  27
  5.5 肝细胞受损后热休克蛋白的变化  27-28
  5.6 肝细胞受损后的细胞因子  28
  5.7 问题与展望  28-30
第6章结论  30-32
参考文献  32-38
缩略语词汇表  38-40
附录图表  40-46
致谢  46-48
攻读硕士学位期间的研究成果  48

阿奇霉素诱导小鼠急性肝损伤模型的建立及其分子病理的研究

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