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脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织Fas凋亡途径表达的影响

作　者: 夏相宜
导　师: 蔡光先
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 脑缺血脑健胶囊 Fas凋亡途径免疫组化 ELISA
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

目的：通过研究脑健胶囊对脑缺血后神经功能损伤程度、脑梗死面积、脑含水量和大鼠体质量的影响,确定脑健胶囊最佳剂量;并研究脑健胶囊调控脑缺血后Fas凋亡途径中FADD、caspase-8、caspase-3因子表达的影响,探讨该方抗脑缺血损伤的机制,揭示该方抗缺血性脑损伤、抑制神经元凋亡的分子机制。方法：1.随机将SD大鼠分为补阳还五汤组、脑健胶囊高、中、低3个剂量组、模型组和假手术组共6组,每组20只,采用大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血大鼠模型。除假手术组和模型组给予等体积无菌蒸馏水以外,其余六组在MCAO造模后灌胃给药,每日1次；共持续7天。在造模后第1天和第7天进行神经功能评分,每日称取体重,第7天取脑组织做TTC、脑干/湿重比观察。2.随机将SD大鼠分为补阳还五汤组、脑健胶囊、模型组和假手术组共4组,除假手术组10只外,余每组50只。除正常组和模型组给予等体积无菌蒸馏水以外,其余两组在MCAO造模后给药,将各组大鼠分别存活1、3、7、14、28天取脑组织及腹主动脉采血。运用免疫组化法和Elisa法检测脑组织及血液中FADD、caspase-8、caspase-3因子表达。结果：1.MCAO大鼠模型建立后,均有明显的神经功能受损的表现；除假手术组外,各组分值差别均无统计学意义p>0.05)。与模型组相比,脑健胶囊组脑梗死面积比减小(P<0.05),脑含水量百分比均明显减低(P<0.05)。2.血清学结果表明：脑缺血后,MCAO大鼠血清中caspase-8、 caspase-3浓度均有明显升高,分别经过1、3、7、14、28天的治疗后,与模型组相比,脑健胶囊组血清含量有统计学意义p<0.05),并能使caspase-8、caspase-3峰值延迟。3.免疫组化结果显示：各组大鼠海马CA1、皮质区均有一定数量的FADD、caspase-8、caspase-3表达。与模型组相比,脑健胶囊组表达均明显降低,并且有统计学差异(P<0.05)。结论：1.脑缺血7天后,脑健胶囊最佳剂量为中剂量2.41g/kg/d;2.脑健胶囊可以减少脑梗死面积、减轻脑水肿、并促进脑缺血后大鼠体质量增加;3.脑健胶囊通过抑制缺血后脑组织FADD、Caspase-3、8的表达,从而起到保护缺血后的脑组织的作用,减轻脑组织损伤。

全文目录

英文缩略词  7-9
中文摘要  9-11
ABSTRACT  11-14
引言  14-16
第一部分不同剂量的脑健胶囊对MCAO大鼠的影响  16-34
  1. 实验材料  16-17
    1.1 实验动物  16-17
    1.2 实验方剂  17
    1.3 试剂  17
    1.4 主要仪器  17
  2. 实验方法  17-22
    2.1 分组  18
    2.2 造模  18-19
    2.3 神经功能评价  19
    2.4 给药  19-20
    2.5 脑梗死面积比检测  20
    2.6 脑干湿重比检测  20-21
    2.7 统计学方法  21-22
  3 结果与分析  22-27
    3.1 脑健胶囊对MCAO大鼠神经功能评分的影响  22-23
    3.2 脑健胶囊对MCAO大鼠脑梗死面积比的影响  23-25
    3.3 脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织含水量比的影响  25-26
    3.4 脑健胶囊对MCAO大鼠体质量变化情况的影响  26-27
  4 讨论  27-33
    4.1 中医对中风的认识  27-32
      4.1.1 《内经》对中风的认识  27-28
      4.1.2 张仲景对中风的认识  28-29
      4.1.3 隋唐时期对中风的认识  29
      4.1.4 金元四大家论治中风  29-31
      4.1.5 明清医家对中风理论的完善  31-32
    4.2 创新药物脑健胶囊  32-33
  5. 结论  33-34
第二部分脑健胶囊对MCAO大鼠FAS凋亡途径的影响  34-54
  1 实验材料  34-36
    1.1 实验动物  34-35
    1.2 实验药物  35
    1.3 实验试剂  35
    1.4 主要仪器  35-36
  2 实验方法  36-39
    2.1 分组  36
    2.2 给药  36
    2.3 取材  36-37
    2.4 ELISA法检测 caspase-8、caspase-3  37
    2.5 免疫组化法检测FADD、caspase-8、caspase-3  37-39
    2.6 统计学处理  39
  3 结果与分析  39-47
    3.1 ELISA结果与分析  39-42
      3.1.1 脑健胶囊对MCAO大鼠血清中caspase-8浓度的影响  39-40
      3.1.2 脑健胶囊对MCAO大鼠血清中caspase-3浓度的影响  40-42
    3.2 免疫组化结果与分析  42-47
      3.2.1 脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织海马皮质区FADD表达的影响  42-43
      3.2.2 脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织海马CA1区caspase-8表达的影响  43-45
      3.2.3 脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织海马CA1区caspase-3表达的影响  45-47
  4 讨论  47-53
    4.1 对脑缺血后细胞凋亡的认识  47-48
    4.2 导致细胞凋亡的因素  48-49
    4.3 死亡受体凋亡途径  49-50
    4.4 Fas介导的细胞凋亡信号传导机制  50-53
      4.4.1 Fas相关死亡域蛋白(FADD)  50-51
      4.4.2 Caspase家族  51-53
  5 结论  53-54
致谢  54-56
参考文献  56-61
附图  61-66
综述  66-77
  参考文献  74-77

脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织Fas凋亡途径表达的影响

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