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抗光敏合剂对中波紫外线所致HaCaT细胞增殖活性变化、细胞凋亡及周期的影响

作　者: 廖明志
导　师: 孙丽蕴
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中医外科学
关键词: 抗光敏合剂紫外线 HaCaT细胞细胞凋亡细胞周期
分类号: R275.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

光敏性皮肤病,是由日光照射在含有光敏性物质的皮肤上所引起的—组皮肤病,属于皮肤科的常见病、多发病,中医称之为“日晒疮。”其发病机理与紫外线辐射损伤表皮角质形成细胞密切相关。北京中医医院自制的抗光敏合剂,药选青蒿、茵陈、赤芍、凌霄花等6味中草药,临床应用表明对光敏性皮肤病具有较好的疗效,目前国内外未见其对皮肤紫外线损伤防护作用的基础研究。本研究通过建立中波紫外线(UVB)照射的人永生化上皮角质形成细胞(HaCaT细胞)损伤模型,目的是模拟紫外线对皮肤角质形成细胞的辐射损伤,检测抗光敏合剂对UVB辐射损伤的HaCaT细胞有无防护作用,若有防护作用则探讨其保护机制。目的建立UVB辐射的HaCaT(?)细包损伤模型,并初步探索抗光敏合剂对HaCaT细胞的保护机制。方法1.细胞培养以含有10%胎牛血清及1%双抗的MEM培养液培养HaCaT细胞,定量接种于培养皿或96孔板中。2.抗光敏合剂含药血清的制备根据实验设计制备等量的含药血清及空白血清。3.体外紫外线辐射损伤皮肤角质形成细胞模型制作培养HaCaT细胞生长至一定程度根据实验设计定时以一定剂量的UVB照射细胞并于照射前后加入相关药物进行干预处理。4.羟氯喹浓度检测cck-8法检测出最佳浓度。5.抗光敏台剂对HaCaT细胞增殖活性的影响cck-8法检测细胞增殖活性。6.抗光敏合剂对UVB辐射后HaCaT细胞增殖活性的影响cck-8法检测细胞增殖活性。7.凋亡指数及细胞周期的检测用流式细胞仪检测不同处理条件下的凋亡指数及细胞周期变化情况。结果1.羟氯喹对UVB辐射后HaCaT(?)细胞增殖活性的影响照射后加入不同剂量羟氯喹处理组的HaCaT细胞存活率与照射对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),表明经过羟氯喹干预处理后HaCaT细胞活性可有一定程度的恢复,其中以20ug/ml羟氯喹组的细胞存活率最高。2.抗光敏合剂对HaCaT(?)细胞增殖活性的影响加药组的HaCaT细胞存活率与空白组相比,有显著差异(P<0.01),表明抗光敏合剂含药血清具有促进HaCaT细胞生长的作用；阳性药对照组的细胞存活率与空白组相比,无明显差异(P>0.05),表明20ug/ml的羟氯喹对HaCaT细胞活性无影响。3.抗光敏合剂含药血清对UVB照射后HaCaT(?)细胞活力的影响实验组的HaCaT细胞存活率与模型组相比,有显著差异P<0.01),表明抗光敏合剂含药血清可使UVB辐射后的HaCaT细胞活性有一定程度的恢复;阳性药对照组的细胞存活率明显高于实验组,差异有统计学意义(P<0.01),表明抗光敏合剂含药血清对HaCaT(?)田胞的保护作用不如20ug/ml的羟氯喹。4.抗光敏合剂含药血清对UVB照射后HacaT细胞凋亡的影响实验组的HaCaT细胞凋亡率与模型组相比有一定的下降,差异无统计学意义(P>0.05),表明抗光敏合剂含药血清对HaCaT(?)田胞凋亡抑制作用不明显。5.抗光敏合剂含药血清对UVB照射后HacaT(?)田胞周期的影响HaCaT(?)细胞经30mJ/cm2(?)勺UVB辐射后,发生了明显的S期阻滞,加入抗光敏合剂含药血清干预处理后S期细胞数量有一定的下降，但差异无统计学意义P>0.05)。结论本研究结果显示：一定剂量的抗光敏合剂可轻度抑制UVB辐射所致的细胞周期改变,从而减轻中波紫外线辐射对HaCaT(?)细胞的损伤作用,并对UVB辐射所致的细胞凋亡轻度抑制作用,具有光保护效能。

全文目录

目录  3-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-10
英文缩写  10-11
文献综述  11-25
  一、光敏性皮肤病的中医研究进展  11-19
    (一)、中医中药对光敏性皮肤病的临床研究  11-16
    (二)、中医中药对光敏性皮肤病的机理研究  16-19
  二、光敏性皮肤病的现代医学研究进展  19-25
    (一)、光敏性皮肤病的分类  19-20
    (二)、光敏性皮肤病的发病机制研究  20-23
    (三)、光敏性皮肤病的西医治疗  23-25
实验一、抗光敏合剂含药血清的制备  25-26
  一、实验材料  25
  二、实验方法  25-26
实验二、抗光敏合剂对中波紫外线所致HaCaT细胞增殖活性变化、细胞凋亡及周期的影响  26-38
  一、实验材料  26-27
  二、实验方法  27-31
    1. HaCaT细胞的复苏、培养、传代与冻存  27-28
    2. HaCaT细胞光损伤模型的建立  28
    3. 羟氯喹对UVB辐射后HaCaT细胞增殖活性的影响——CCK-8法  28-29
    4. 抗光敏合剂对HaCaT细胞增殖活性的影响——CCK-8法  29
    5. 抗光敏合剂对UVB辐射后HaCaT细胞增殖活性的影响——CCK-8法  29
    6. Annexin V-PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死  29-30
    7. CycleTEST PLUS DNA试剂盒流式细胞仪检测细胞周期进程  30-31
    8. 统计方法  31
  三、实验结果  31-35
    1. 羟氯喹对UVB辐射后haCaT细胞增殖活性的影响  31-32
    2. 抗光敏合剂对HaCaT细胞增殖活性的影响  32-33
    3. 抗光敏合剂对UVB辐射后HaCaT细胞增殖活性的影响  33-34
    4. Annexin V-PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率  34
    5. CycleTEST PLUS DNA试剂盒流式细胞仪检测细胞周期进程  34-35
  四、分析与讨论  35-38
参考文献  38-43
致谢  43-44
个人简历  44

抗光敏合剂对中波紫外线所致HaCaT细胞增殖活性变化、细胞凋亡及周期的影响

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