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电针对脑缺血再灌注大鼠脑内ERK信号通路影响的实验研究

作　者: 李春
导　师: 周国平
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 针灸推拿学
关键词: 电针 I/R大鼠神经功能缺损评分脑组织形态学细胞凋亡 ERK p-ERK
分类号: R246.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

目的：观察电针对脑缺血再灌注大鼠脑内细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响,探讨电针抗脑缺血再灌注损伤脑细胞凋亡的机理。方法：将250只健康雄性SD大鼠随机分成5组：假手术组、模型组、电针组、ERK阻滞剂组、ERK阻滞剂+电针组,50只/组。每组再依据不同时间点,随机分成5个亚组,即2小时组(2h)、6小时组(6h)、1天组(1d)、3天组(3d)、1周组(1W),每组10只。除假手术组,其余大鼠均采用改良线栓法制备脑缺血再灌注(CIR)模型,电针组予电针治疗,ERK阻滞剂组,于造模前在相应脑区注射PD98059,电针+ERK阻滞剂组于注射PD98059并造模后予电针治疗。采用神经学分级评分测试大鼠运动行为等整体功能；TTC及HE染色观察大脑形态学改变；TUNEL法检测病灶局部神经细胞凋亡指数；采用免疫组化检测病灶区p-ERK蛋白水平表达。结果：1.神经功能缺损评分比较：同一时间点,模型组、电针组、ERK阻滞剂组、ERK阻滞剂+电针组神经功能缺损评分明显高于假手术组(P<0.01)；电针组与模型组比较,在3天(P<0.05)、1周(P<0.01)时间点有较显著差异；ERK阻滞剂+电针组较ERK阻滞剂3天、1周时间点神经功能缺损评分有所降低(P<0.05)。2.形态学比较：大体形态上,与假手术组比较,各组出现不同程度脑梗(P<0.01),电针组、阻滞剂+电针组较模型组梗死小,在6小时、1天、3天、1周时间点(P<0.05),3天、1周时间点有较显著差异(P<0.01)；ERK阻滞剂+电针组各时间点均较ERK阻滞剂组梗死程度轻,其中3天、1周时间点较为显著(P<0.01)；显微形态上,与假手术组比较,其他各组均出现不同程度的细胞结构破坏、变性坏死;电针组较模型组、ERK阻滞剂组、ERK阻滞剂+电针组坏死程度稍轻。3.细胞凋亡比较：细胞收缩,体积变小,细胞间正常接触减少核心染色质广泛浓缩,这些凋亡情况以及凋亡率,假手术组均大大低于模型组、电针组、ERK阻滞剂组、ERK阻滞剂+电针组(P<0.01)；EA组凋亡情况及凋亡率在各时间点均低于模型组,在1天、3天时间点有显著差异(P<0.01)；；ERK阻滞剂+电针组各时间点较ERK阻滞剂组凋亡轻,在3天时间点显著(P<0.01)。4.p-ERK蛋白水平比较：病灶侧皮质与海马CA1区p-ERK表达基本一致,假手术组、阻滞剂组各时间点表达不明显,模型组明显表达,但呈现表达逐渐下降过程,1天后开始表达下降,3天、1周时间点基本与假手术组相似；与假手术组比较,模型组、电针组、阻滞剂+电针组均有上调,与模型组比较,各相应时间点,电针组、电针+阻滞剂组p-ERK均有明显表达,3天、1周时间点较模型组显著(P<0.01);ERK阻滞剂+电针组与ERK阻滞剂组比较,后者表达较前者明显,2小时6小时、1天时间点(P<0.05),3天、1周时间点(P<0.05)。结论：1.电针“尺泽、合谷”、“足三里、三阴交”能明显改善I/R大鼠的神经功能缺损和缺血损伤后的脑组织形态,并能降低细胞凋亡指数,提示电针“尺泽、合谷”、“足三里、三阴交”对缺血损伤脑组织具有一定的保护作用。2.电针“尺泽、合谷”、“足三里、三阴交”可促进造模后的p-ERK上调,提示ERK信号转导通路的激活是电针“尺泽、合谷”、“足三里、三阴交”促缺血性损伤脑组织修复的重要特征。3.电针“尺泽、合谷”、“足三里、三阴交”对脑缺血再灌注后的神经功能缺损、脑组织形态、细胞凋亡指数的改善以及p-ERK的上调均在脑缺血再灌注后3天时间点处较为明显,表明该时间点为促进自身修复的较佳治疗时间窗。4.实验结果提示“针刺刺激—启动ERK信号调控-拮抗细胞凋亡”,是针刺治疗脑缺血/再灌注后脑损伤关键作用机制之一。

全文目录

中英文缩略表  6-7
中文摘要  7-10
Abstract  10-15
前言  15-18
第一部分材料与方法  18-28
  1. 实验材料  18-19
    1.1 实验动物  18
    1.2 实验仪器  18-19
    1.3 实验器械  19
    1.4 实验试剂  19
  2. 实验方法  19-23
    2.1 动物分组  19-20
    2.2 模型制备  20-21
    2.3 穴位定位  21-22
    2.4 分组处理  22-23
    2.5 标本取材  23
  3. 观察指标与方法  23-27
    3.1 大鼠神经功能缺损评分  23-24
    3.2 大脑组织形态学  24-25
    3.3 神经细胞凋亡指数  25-26
    3.4 p-ERK表达水平  26-27
  4. 统计方法  27-28
结果与分析  28-35
  1. 电针对脑缺血再灌注(I/R)大鼠神经功能缺损评分的影响  28-29
  2. 电针对脑缺血再灌注(I/R)大鼠脑组织大体形态学影响(TTC染色)  29-30
  3. 电针对脑缺血再灌注(I/R)大鼠脑组织显微形态学影响(HE染色)  30-31
  4. 电针对脑缺血再灌注(I/R)大鼠神经细胞凋亡指数的影响  31-32
  5. 电针对脑缺血再灌注(I/R)大鼠p-ERK表达的影响(免疫组化检测)  32-35
第三部分讨论  35-48
  1. 中医学对缺血性脑血管疾病的认识  35-36
  2. 西医学对缺血性脑血管疾病的认识  36-38
  3. 脑缺血疾病与脑缺血再灌注的关系及机制简介  38-39
  4. 脑缺血再灌注与细胞凋亡的关系  39-40
  5. 细胞凋亡与ERK的关系  40-42
  6. ERK与电针的相关性  42-48
    6.1 针刺介入时间差异分析  42-45
    6.2 电针穴位及参数的选择  45-46
    6.3 电针抗细胞凋亡与ERK的相关性  46-48
结论  48-49
致谢  49-50
参考文献  50-53
附录文献综述  53-65
  参考文献  63-65

电针对脑缺血再灌注大鼠脑内ERK信号通路影响的实验研究

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