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强脉冲光对TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖的影响及ERK抑制剂的作用
作 者: 仇克清
导 师: 黄进华
学 校: 中南大学
专 业: 皮肤病与性病学
关键词: 强脉冲光 转化生长因子β1 成纤维细胞 ERK信号通路 细胞增殖
分类号: R751
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
目的1.观察转化生长因子-p1对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖的影响。2.探讨强脉冲光在转化生长因子-p1介导的成纤维细胞增殖中的作用及细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的研究。方法1.利用包皮环切术切除的正常青少年包皮组织,体外分离培养人正常皮肤原代成纤维细胞,采用角蛋白和Ⅰ、Ⅲ型胶原染色进行成纤维细胞的鉴定。2.实验分为3部分:(1)实验一:TGF-β1浓度处理组,采用不同浓度的TGF-β1分别处理各组成纤维细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况;(2)实验二:分为①TGF-β1浓度组:10.0ng/ml、5.0ng/ml、1.0ng/ml及0ng/ml.②时间组:给予10.0ng/ml的TGF-β1刺激细胞,分别在不同时间Omin、15min、30min、60min及120min的时间点提取蛋白。应用蛋白质免疫印迹(western blot)法测定各组磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的变化。(3)实验三:对照组、TGF-β11.0ng/ml、10.0ng/ml、IPL照射剂量72J/cm2组、72J/cm2+TGF-β110.Ong/ml、PD98059+72J/cm2组、PD98059+TGF-β110.Ong/ml组及PD98059+72J/cm2+TGF-β110.0ng /ml组分别处理成纤维细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况;应用蛋白质免疫印迹(western blot)法测定各组磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的变化。结果1.体外培养成纤维细胞经Ⅰ、Ⅲ型胶原染色阳性,角蛋白染色阴性,细胞具有成纤维细胞形态。2.1成纤维细胞经不同浓度转化生长因子-β1作用后,与对照组比较,各组浓度的TGF-β1分别处理24及48小时后,0.01ng/ml、0.1 ng/ml、1.0ng/ml、50.0ng/ml的TGF-β1对成纤维细胞增殖活性均无显著增加(P>0.05),在TGF-β1浓度为10.0ng/ml时,细胞增殖活性较对照组显著增高(P<0.05)。2.2与对照组相比:TGF-β1各浓度组及时间组p-ERK蛋白表达均有差异,随着TGF-β1剂量的增加和作用时间的延长,其磷酸化ERK蛋白表达水平逐渐增强,在TGF-β1 10.0ng/ml时p-ERK表达达高峰,在15分钟时,磷酸化ERK蛋白表达水平开始增加,在60分钟时p-ERK表达水平达高峰。120分钟时p-ERK表达有所衰减。2.3在抑制剂干预组中,与对照组相比:在IPL照射及TGF-β1作用24及48小时后,TGF-β110.0ng/ml、IPL照射剂量72J/cm2组和72J/cm2+TGF-β110.0ng/ml组成纤维细胞增殖活性明显增加(P<0.01),其磷酸化ERK表达水平亦增加。而PD98059+TGF-β110.0ng/ml、PD98059+72J/cm2较对照组细胞增殖活性降低(P<0.05),但其磷酸化ERK表达水平稍有增加。余组未见明显变化。结论1.大剂量TGF-β1可促进体外培养的成纤维细胞增殖并且可上调细胞内的ERK信号蛋白活性。TGF-β1诱导的成纤维细胞的p-ERK水平增高可能是依赖ERK通路激活的。2.强脉冲光可促进体外培养的成纤维细胞增殖,其增殖机制之一可能是通过ERK信号通路实现的。3. TGF-β1与IPL在成纤维细胞增殖作用中可能存在协同交互作用。
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全文目录
中文摘要 4-6 ABSTRACT 6-9 缩略词 9-12 第一章 前言 12-16 第二章 材料与方法 16-27 2.1 主要试剂与设备 16-20 2.1.1 主要耗材与设备 16-17 2.1.2 主要试剂 17-18 2.1.3 试剂的配制 18-20 2.2 实验方法与操作步骤 20-26 2.2.1 细胞原代培养 20 2.2.2 细胞计数 20-21 2.2.3 成纤维细胞免疫细胞化学鉴定 21 2.2.4 TGF-β1对成纤维细胞的干预及强脉冲光的照射 21-22 2.2.5 ERK抑制剂PD98059干预 22 2.2.6 MTT法检测成纤维细胞的增殖活性 22-23 2.2.7 免疫印迹法(Immunoblotting)检测磷酸化细胞外信号调节激酶的表达 23-26 2.3 统计学方法 26-27 第三章 结果 27-34 3.1 人皮肤成纤维细胞鉴定 27-29 3.1.1 形态学鉴定 27-28 3.1.2 免疫细胞化学鉴定 28-29 3.2 TGF-β1对成纤维细胞增殖活性的影响 29-30 3.3 TGF-β1对成纤维细胞p-ERK表达的影响 30-31 3.4 TGF-β1在不同时间点对成纤维细胞p-ERK表达的影响 31 3.5 IPL在TGF-β1介导的成纤维细胞中影响及抑制剂的作用 31-34 第四章 讨论 34-38 第五章 结论 38-39 参考文献 39-43 综述 43-54 参考文献 51-54 致谢 54-55 攻读学位期间主要的研究成果目录 55
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中图分类: > 医药、卫生 > 皮肤病学与性病学 > 皮肤病学
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