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人骨肉瘤细胞阿霉素耐药株MG63/ADR的建立及采用基因芯片技术对骨肉瘤耐药相关基因的初步研究

作　者: 吴小三
导　师: 张春林
学　校: 苏州大学
专　业: 骨外科
关键词: 骨肉瘤细胞MG63 多药耐药阿霉素骨肉瘤耐药 illumina基因芯片
分类号: R738.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 97次
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内容摘要

第一部分人骨肉瘤细胞阿霉素耐药株MG63/ADR的建立及其生物学特性目的:建立骨肉瘤多药耐药株体外模型,探讨逆转骨肉瘤MDR的方法方法:采用阿霉素浓度递增培养法,建立人骨肉瘤MG63的多药耐药细胞株MG63/ADR。MTT法观察细胞的生长规律和多药耐药性,流式细胞仪检测细胞周期分布,Western blot、RT-PCR分别检测耐药相关基因(mdr、bcl-2、cyclinD1、survivin)表达及蛋白表达的变化。结果:与MG63细胞比较,MG63/ADR细胞G0/G1期细胞减少10.61%,S期细胞增加15.06%。该细胞株对多种抗肿瘤药物耐药,MG63/ADR对阿霉素的耐药指数是亲本细胞的9.09倍,对顺铂(DDP)、甲氨蝶呤(MTX)、表阿霉素(EPB)、长春新碱(VCR)四种药物耐药指数均显著增加。耐药相关基因mdr、bcl-2、cyclinD1的表达显著增加,survivin基因表达有一定增加,上述四种耐药相关基因蛋白表达均明显增加。结论:建立的骨肉瘤MG63/ADR细胞具有多药耐药特性,其耐药性与mdr、bcl-2、cyclinD1、survivin等基因的过表达有关。第二部分illumina基因芯片对骨肉瘤耐药相关基因的研究目的:运用基因芯片技术研究骨肉瘤耐药基因表达谱特征,探讨耐药相关基因方法:提取人骨肉瘤MG63细胞及其耐药细胞MG63/ADR两个样本中总RNA,Illumina寡核苷酸基芯片分析每个样本的48 000个基因变化。结果:MG63/ADR样本与MG63样本相比,共有2550个基因调节变化显著,其中上调1194个基因;下调1356个基因。分子及生物功能分析显示上凋表达的基因涉及传递蛋白、蛋白翻译合成、代谢、转录调控、信号转导、趋化因子、细胞周期和凋亡相关等种类。与肿瘤耐药密切相关的细胞周期和凋亡相关142个基因,其中上调77个基因,下调65个基因。结论:骨肉瘤化疗耐药涉及多基因多阶段的复杂过程,基因芯片技术有利于进一步揭示耐药机制,发现新的治疗靶点。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
第一部分人骨肉瘤细胞阿霉素耐药株MG63/ADR 的建立及其生物学特性  9-24
  引言  9-10
  材料和方法  10-13
  结果  13-17
  讨论  17-21
  结论  21-22
  参考文献  22-24
第二部分 illumina 基因芯片对骨肉瘤耐药相关基因的研究  24-36
  引言  24-25
  材料与方法  25-27
  结果  27-28
  讨论  28-32
  结论  32-33
  参考文献  33-36
附录一综述骨肉瘤细胞化疗耐药机制的研究进展  36-47
附录二 Illumina 基因芯片耐药相关基因信息表  47-54
攻读学位期间公开发表的论文  54-55
致谢  55-56

人骨肉瘤细胞阿霉素耐药株MG63/ADR的建立及采用基因芯片技术对骨肉瘤耐药相关基因的初步研究

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