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寻常型银屑病患者外周血中Th22细胞及血清中IL-22的表达

作　者: 简瑜
导　师: 董萍云
学　校: 河北医科大学
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 寻常型银屑病 Th22细胞 IL-22 流式细胞术 ELISA PASI评分
分类号: R758.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：银屑病（psoriasis）是一种常见的慢性、复发性、炎症性皮肤病。特征皮损为：在大小不等，边界清晰的红色、圆形、干燥性斑块上覆盖叠瓦状或板层状银白色鳞屑[1]。好发于头皮、指（趾）甲、四肢伸侧、肘膝等部位。可见于任何年龄，男女发病无显著差异，常在青壮年时发病。银屑病在我国的患病率，近年尚无大规模的调查结果。诱发因素及发病机制至今尚不完全清楚，多认为该银屑病的发生与T淋巴细胞，特别是Th1细胞的过度活化及功能异常有关[2]，是一种自身免疫性疾病。Th22细胞特征性产生白介素22(interleukin22，IL-22)，不分泌IL-17和IFN-γ。Stefanie Eyerich等运用免疫病理学等多种方法证明Th22细胞是独特的人类T细胞亚型，参与表皮免疫与重塑[3]。Th22细胞首次发现于银屑病皮损中，与银屑病的发病机制密切相关。但血液中Th22细胞的数量及作用尚不清楚。IL-22主要作用于上皮细胞，调节皮肤角质形成细胞的分化和上皮增生，在伴有显著棘层增厚的炎症性皮肤病中发挥至关重要的作用[4]。本实验应用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）确认并计数寻常型银屑病患者外周血中Th22细胞（CD4+IL-22+T细胞）的表达比例，应用双抗体夹心ELISA方法定量检测寻常型银屑病患者血清中IL-22的表达量。评估Th22细胞及IL-22在寻常型银屑病不同分期（进展期和稳定期）表达水平的差异，以及二者与银屑病临床皮损面积和严重程度指数（PASI）评分值之间的关系。初步探索Th22细胞及其效应因子IL-22在银屑病发病及皮损维持中的作用。方法：选择2011年3月至2011年12月期间就诊于河北医科大学第二医院皮肤科门诊的寻常型银屑病患者为病例组。入选标准：1寻常型银屑病患者皮损典型、诊断明确。2检测前1月内未接受对免疫功能有影响的药物的系统性治疗，如糖皮质激素、免疫抑制剂等。3除外自身免疫性疾病及其它各种严重的慢性系统性疾病，如系统性红斑狼疮、糖尿病等。选择本院健康医护人员为健康对照组。病例组共23人，男12例，女11例，年龄19～53岁，平均年龄33.30±11.30岁。按银屑病分期将病例组分为：进展期组12例和稳定期组11例。并由同一工作人员依据银屑病临床皮损面积和严重程度对病例组进行PASI评分。健康对照组共11人，男5例，女6例，年龄20～52岁，平均年龄27.27±8.63岁，经t检验，性别、年龄与病例组无显著差异。外周血Th22细胞的检测:采集病例组及健康对照组肘静脉血4ml放入肝素钠抗凝管中，8小时内分离出外周血单个核细胞（PBMC），加入莫能霉素（Monensinsolution）、佛波醇-12-肉豆蔻酯-13-乙酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate PMA)、离子霉素（Ionomycin）置于37℃，5%二氧化碳孵箱中刺激4小时，然后进行细胞表面染色、固定、透化破膜及胞内细胞因子染色，最后用流式细胞仪测定Th22细胞/淋巴细胞的百分比。血清中IL-22的检测:采集病例组及健康对照组肘静脉血2ml放入EDTA抗凝管中，离心收集血清标本置于-20℃的冰箱中保存。应用双抗体夹心ELISA法检测收集到的所有病例组及健康对照组血清标本中IL-22的表达水平。应用SPSS13.0软件进行统计学分析，经正态性检验，病例组和对照组，进展期组和静止期组的实验所得数据均呈正态分布，故实验结果用均数±标准差描述，采用两个独立样本t检验进行各组数据间的比较，分析外周血中Th22细胞及血清中IL-22的表达水平在病例组和对照组之间，进展期组和静止期组之间有无统计学差异。经正态性检验PASI评分值数据呈偏态分布，故采用非参数统计方法中的变量等级相关分析spearman法统计分析寻常型银屑病患者外周血中Th22细胞及血清中IL-22表达水平与PASI评分值之间的关系。检验水准取P<0.05有统计学意义。结果：1流式细胞术检测结果（％）：外周血中Th22细胞表达百分比病例组1.90±1.73与健康对照组1.47±0.96相比差异无统计学意义(t=1.115P=0.273P＞0.05)；进展期组2.30±1.63与静止期组1.75±1.29相比差异无统计学意义(t=0.923P=0.367P＞0.05)；病例组外周血Th22细胞的表达水平与PASI评分值无直线相关关系(r=0.379P=0.074P＞0.05)。2双抗体夹心ELISA方法检测结果（pg/ml）：血清中IL-22表达量病例组8.46±6.23高于健康对照组5.28±2.66，差异有统计学意义(t=2.727P=0.01P<0.05)；进展期组8.75±4.58高于静止期组6.35±2.46，差异有统计学意义(t=-2.509P=0.023P<0.05)；血清中IL-22表达水平与PASI评分值有正相关关系(r=0.415P=0.049P<0.05)。结论：1寻常型银屑病患者外周血Th22细胞百分比与健康对照组比较差别无统计学意义，进展期组与稳定期组比较差别无统计学意义。提示外周血Th22细胞表达百分比可能与寻常型银屑病发病无直接相关性，与疾病发展和皮损维持亦无直接相关性。2寻常型银屑病患者外周血Th22细胞百分比与PASI评分值之间无相关关系。提示外周血Th22细胞百分比可能与银屑病皮损面积及病情严重程度间无明确关联，还不能将其作为反映评价疾病严重程度的指标。3寻常型银屑病患者血清IL-22表达量高于正常对照组，进展期组高于稳定期组，差异有统计学意义。提示IL-22可能参与寻常型银屑病的发病。血清中IL-22表达水平可能与寻常型银屑病的炎症发展和皮损维持密切相关。同时可能间接反映了Th22细胞在寻常型银屑病中的作用。4寻常型银屑病患者血清中IL-22表达量与银屑病PASI评分值之间呈正相关关系。提示PASI评分越高，血清中IL-22的表达水平越高。由此得出，血清中IL-22的表达水平可作为反映评价银屑病严重程度的指标。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
前言  11
材料与方法  11-17
结果  17-19
附图  19-24
附表  24-26
讨论  26-32
结论  32-33
参考文献  33-37
综述 IL-22 的特征及 Th22 细胞的研究进展  37-47
  参考文献  42-47
致谢  47-48
个人简历  48

寻常型银屑病患者外周血中Th22细胞及血清中IL-22的表达

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