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大鼠再生肝脏细胞周期的研究

作　者: 刘锋瑞
导　师: 杨军英
学　校: 河南师范大学
专　业: 发育生物学
关键词: 大鼠再生肝细胞增殖细胞周期流式细胞术
分类号: Q253
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:通过分离、纯化再生肝中各种细胞,研究大鼠肝再生中肝脏细胞增殖周期变化及体内外细胞增殖周期异同。方法:建立大鼠2/3肝切除模型,分别于术后恢复0h、12h、24h、27h、30h、33h、36h、39h、42h、48h、60h、72h、96h、120h等时间点采用原位胶原酶消化和密度梯度离心法分离、纯化再生肝脏细胞;用免疫组织化学方法鉴定获得的再生肝脏细胞;用流式细胞术测定再生肝脏细胞DNA含量,分析增殖特点。建立再生肝肝细胞体外培养方法,用流式细胞术检测不同时间点培养细胞的增殖特点。结果:成功分离出再生肝细胞、胆管上皮细胞、库普弗细胞、肝血窦内皮细胞、肝星状细胞、肝卵圆细胞等,细胞活性均在95%以上。免疫组化显示,分离的细胞纯度均在90%以上,符合实验要求。肝再生中,肝细胞周期约30h,G1期约为6h,S期约12h,G2/M期约12h。胆管上皮细胞周期约48h,G0/G1期约为18h,S期约24h,G2/M期约9h。库普弗细胞周期约24h,G0/G1期约为9h,S期约9h,G2/M期约6h。窦内皮细胞周期约33h,G0/G1期约为9h,S期约12h,G2/M期约12h。肝星形细胞周期约36h,G0/G1期约为12h,S期约12h,G2/M期约12h。肝卵圆细胞周期约30h,G0/G1期约为12h,S期约12h,G2/M期约6h。体外培养的再生肝细胞,细胞生长状态良好,具有正常肝细胞功能。培养过程中再生肝细胞调整期稍有变化,细胞增殖主要发生在培养24h以后,72h时达到增殖高峰,然后逐渐减慢。细胞增殖周期约24-48h。结论:肝再生中,肝细胞首先增殖,周期约30h;其次增殖细胞为库普弗细胞、窦内皮细胞、肝星形细胞、肝卵圆细胞其周期分别为24h、33h、36h、30h、最后增殖细胞为胆管上皮细胞,周期约48h。再生肝细胞体外培养与体内增殖结果比较,初步发现体外培养的肝细胞增殖减缓,体外增殖高峰滞后。

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摘要 4-5ABSTRACT 5-7缩略表 7-10第一章文献综述 10-20 1.1 肝再生的概念 10-11 1.2 肝再生动物模型 11-12 1.3 肝脏细胞与肝再生 12-14 1.4 肝脏细胞的分离、纯化与培养 14-16 1.5 肝再生与细胞增殖 16-17 1.6 细胞增殖周期的测定 17-18 1.7 本论文的研究目的、意义和方案 18-20第二章再生肝脏细胞体内周期的测定 20-58 2.1 引言 20 2.2 材料与方法 20-28 2.2.1 实验动物 20 2.2.2 大鼠2/3 肝切除模型构建 20 2.2.3 再生肝脏细胞的制备 20-25 2.2.4 再生肝脏细胞的鉴定 25-27 2.2.5 再生肝脏细胞的细胞周期测定 27-28 2.3 实验结果 28-52 2.3.1 再生肝细胞细胞周期 28-32 2.3.2 再生肝胆管上皮细胞细胞周期 32-36 2.3.3 再生肝库普弗细胞细胞周期 36-40 2.3.4 再生肝窦内皮细胞细胞周期 40-44 2.3.5 再生肝星形细胞细胞周期 44-48 2.3.6 再生肝卵圆细胞细胞周期 48-52 2.4 讨论 52-58第三章再生肝细胞体外周期的测定 58-68 3.1 引言 58 3.2 材料与方法 58-61 3.2.1 实验动物及饲养 58 3.2.2 大鼠2/3 肝切除模型构建 58 3.2.3 再生肝细胞分离与培养 58-60 3.2.4 培养肝细胞形态 60 3.2.5 肝细胞的鉴定 60 3.2.6 肝细胞功能的鉴定 60 3.2.7 流式细胞术测定细胞周期 60-61 3.3 实验结果 61-66 3.3.1 部分肝切除恢复12h 肝细胞的培养分析 61-63 3.3.2 部分肝切除恢复24 h 肝细胞的培养分析 63-66 3.4 讨论 66-68结论 68-70攻读硕士学位期间参加的科研项目和发表的论文 70-72参考文献 72-79致谢 79-80

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