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绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯对结直肠癌作用的体外研究

作　者: 张春霞
导　师: 金黑鹰
学　校: 南京中医药大学
专　业: 中医外科
关键词: 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG) Notch信号转导途径结直肠癌细胞体外研究基因蛋白
分类号: R735.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对结直肠癌细胞增殖的抑制作用及其作用机理。[方法]体外培养结直肠癌细胞(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞),采用不同浓度的EGCG(10mg/L、20mg/L、35mg/L)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结直肠癌细胞增殖的抑制作用；用流式细胞仪检测EGCG对结直肠癌细胞凋亡和细胞周期的影响；实时荧光定量PCR检测EGCG干预后的结直肠癌细胞的Notch、Notch2、HES1、JAG1基因的表达情况；Western blot检测EGCG干预后的结直肠癌细胞的Notch1、Notch2、 HES1、JAG1蛋白的表达情况。[结果]MTT法检测EGCG对结直肠癌细胞的增殖具有抑制作用。EGCG对结直肠癌细胞的增殖抑制作用具有剂量依赖性,并且对HT29细胞的增殖抑制作用具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结直肠癌细胞的凋亡率,且剂量与细胞凋亡率呈正相关,实验组(35mg/L)与对照组(0mg/L)相比,有统计学意义。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在Go/G1期,阻碍其向S期转入,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转入,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转入,抑制结直肠癌细胞的增殖。实时荧光定量PCR检测EGCG能上调结直肠癌细胞的Notch1基因的表达,下调Notch2、JAG1和HES1基因的表达; Western blot检测EGCG能上调结直肠癌细胞的Notchl蛋白的表达,下调Notch2蛋白的表达,对HES1和JAG1蛋白的表达有下调趋势,但均没有统计学意义(p>0.05)。[结论]EGCG对体外培养的结直肠癌细胞的增殖有明显抑制作用,其作用机制与诱导细胞凋亡和影响细胞周期,上调Notch1基因的表达,下调Notch2、JAG1和HES1基因的表达及上调Notch1蛋白的表达和下调Notch2蛋白的表达有关。

全文目录

摘要  7-8
ABSTRACT  8-9
前言  9-10
第一部分理论研究  10-15
  1. 中医学对结直肠癌的认识  10-12
    1.1 病名  10
    1.2 病因病机  10-11
    1.3 中医治疗  11-12
  2. 绿茶提取物对结直肠癌的作用  12-13
    2.1 中医理论  12
    2.2 现代研究  12-13
  3. 结直肠癌与Notch信号转导途径的关系  13-15
第二部分实验研究  15-33
  1. 噻唑蓝比色法(MTT法)检测EGCG对结直肠癌细胞增殖的抑制作用  15-17
    1.1 材料与方法  15-16
    1.2 实验结果  16-17
  2. 流式细胞仪检测EGCG对细胞凋亡和细胞周期的影响  17-22
    2.1 材料与方法  17-19
    2.2 实验结果  19-22
  3. 实时荧光定量PCR法检测Notch1、Notch2、HES1、JAG1基因表达  22-30
    3.1 材料与方法  22-27
    3.2 结果  27-30
  4. 蛋白印迹法(Western Blot)检测Notch1、Notch2、HES1、JAG1蛋白表达  30-33
    4.1 材料与方法  30-31
    4.2 实验结果  31-33
第三部分讨论  33-37
  1.1 EGCG是绿茶中最具有抗癌活性的成分  33
  1.2 EGCG能增强结肠癌细胞的增殖抑制率  33-34
  1.3 EGCG能诱导细胞凋亡和改变细胞周期  34-35
  1.4 EGCG可以影响Notch信号转导途径的相关基因及蛋白  35-37
结论  37-38
参考文献  38-41
附录  41-47
攻读硕士学位期间取得的学术成果  47-48
致谢  48

绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯对结直肠癌作用的体外研究

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