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一些与生物相关分子作用的荧光猝灭光谱分析

作　者: 吕品
导　师: 曹忠
学　校: 长沙理工大学
专　业: 物理化学
关键词: 荧光猝灭 c-MYC蛋白 镉离子 槲皮素 静态猝灭
分类号: X832
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


近年来,分析仪器和生命科学等技术都得到了突飞猛进的发展,荧光分析方法已经成为光谱化学分析的一种重要的手段,广泛应用于生物物质、无机物、药物等方面的鉴别和测定。本文第一部分采用化学还原法制备了粒径为12nm的球形金纳米溶胶,并对其进行了透射电子显微镜（TEM）表征。以pH=7.40的PBS为缓冲溶液,研究了金溶胶对致癌基因c-MYC蛋白的荧光猝灭效应,其中激发波长为295nm,发射波长为450nm,同时对其现象的形成机理进行探讨。计算表明,猝灭常数为6.291×108L·mol-1,结合常数为1.93×106 L·mol-1,金溶胶与c-MYC蛋白结合位点数为0.9969,属于静态猝灭。而且,该荧光猝灭强度与c-MYC蛋白浓度呈线性关系,检测下限可达到2.51×10-10μmol/L。该方法重现性和稳定性好,回收率在94.29-107.14%范围内,所以可用于致癌基因c-MYC蛋白的检测,在生物医学和分子生物学方面有重要的基础研究价值和应用前景。本文第二部分探讨了一种基于邻-甲氧基四苯基卟啉超分子化合物检测环境废水中痕量Cd2+的高灵敏性、高选择性的荧光光谱分析方法。采用Tris-HCl-四氢呋喃作缓冲溶液,最佳pH值调至8.81,最佳卟啉浓度固定为5.0×10-5mol/L,当Cd2+浓度在5.0×10-8～1.0×10-6mol/L时,荧光熄灭值与其浓度呈线性关系,其线性相关系数为0.9974（n=10）,Cd2+的检测下限可推算出为4.07×10-8mol/L。该方法重现性和稳定性好,一些常见金属离子对测定的干扰很小,检测Cd2+的回收率在98.20 102.00%范围之间。将该方法用于实验室废水和湘江水样品中微量镉的测定结果良好,表明本方法在测量环境废水中痕量Cd2+方面具有可行性,在居民生命健康和环境保护方面有重要应用价值。本文第三部分发展了一种检测药品中槲皮素含量的方法,利用槲皮素可以使牛血清白蛋白发生荧光猝灭的现象来测定槲皮素的含量。在pH=7.40的PBS缓冲溶液,激发波长288nm,发射波长356nm的条件下进行实验。研究发现,槲皮素与牛白蛋白猝灭常数为5.233×104L·mol-1,结合常数4.47×106L·mol-1,结合位点数为0.5362,属于静态猝灭。而且,该荧光猝灭强度与槲皮素浓度呈线性关系,检出下限达到2.43×10-6μmol/L。该方法重现性好,稳定性好,回收率在99.37～102.29%范围,可用于肾石通和普乐安药品中槲皮素的检测,在生物医药工业有重要应用价值。

全文目录


摘要  5-7ABSTRACT  7-12第一章 绪论  12-26  1.1 引言  12-15    1.1.1 动态猝灭  12-13    1.1.2 静态猝灭  13    1.1.3 分子荧光光谱法分析  13-14    1.1.4 荧光分光光度计  14-15  1.2 蛋白质与纳米材料的荧光光谱分析  15-17    1.2.1 c-MYC 蛋白概述及其检测的意义  15    1.2.2 金纳米粒子简介  15-16    1.2.3 荧光光谱法在蛋白质研究中的应用  16-17  1.3 卟啉与金属离子的荧光光谱分析  17-20    1.3.1 卟啉的结构特点和功能特性  17-18    1.3.2 金属卟啉配合物简介  18-19    1.3.3 卟啉在金属离子检测方面的应用  19-20    1.3.4 啉在荧光分析中的应用  20  1.4 黄酮类化合物的荧光光谱分析  20-25    1.4.1 黄酮化合物的生物活性  21-23    1.4.2 槲皮素简介  23-24    1.4.3 药物分子与血清白蛋白的荧光光谱分析  24-25  1.5 课题的主要研究内容  25-26第二章 基于荧光猝灭方法的 C-MYC 蛋白含量的检测  26-37  2.1 前言  26-27  2.2 实验部分  27-28    2.2.1 实验仪器与试剂  27-28  2.3 实验方法  28-29    2.3.1 金溶胶的制备  28    2.3.2 溶液的配制  28-29    2.3.3 最佳激发波长和最佳发射波长的确定  29    2.3.4 以金溶胶为基体的c-MYC 蛋白标准曲线的测定  29    2.3.5 重现性，稳定性及回收率的测定  29    2.3.6 c-MYC 蛋白样品的测定  29  2.4 结果和讨论  29-37    2.4.1 基本原理  29-30    2.4.2 最佳激发波长及发射波长的确定  30    2.4.3 以金溶胶为基体的c-MYC 蛋白标准曲线的测定  30-32    2.4.4 荧光淬灭机理分析  32-34    2.4.5 选择性分析  34    2.4.6 重现性、稳定性与回收率的测定  34-36    2.4.7 c-MYC 蛋白样品的测定  36-37第三章 基于荧光猝灭方法的废水中痕量镉离子的分析检测  37-50  3.1 前言  37-38  3.2 实验部分  38-40    3.2.1 实验仪器与试剂  38-39    3.2.3 溶液配制  39-40  3.3 结果和讨论  40-50    3.3.1 荧光激发和发射波长的确定  40-41    3.3.2 荧光猝灭效应的检测  41-42    3.3.3 测定标准曲线的最佳条件的选择  42-43    3.3.4 标准曲线的测定  43-45    3.3.5 干扰离子的影响  45    3.3.6 重现性、稳定性的测定  45-47    3.3.7 回收率的测定  47    3.3.8 水样的测定  47-48    3.3.9 机理探讨  48-50第四章 基于荧光猝灭方法的药品中槲皮素含量的分析检测  50-64  4.1 前言  50-51  4.2 实验部分  51-52    4.2.1 主要试剂  51    4.2.2 主要仪器  51    4.2.3 实验方法  51-52  4.3 结果和讨论  52-64    4.3.2 基本原理  52    4.3.3 最佳激发波长及发射波长的确定  52-54    4.3.4 槲皮素对牛血清蛋白的荧光猝灭效应  54-59    4.3.5 重现性和稳定性的测定  59-60    4.3.6 选择性的测定  60-61    4.3.7 回收率的测定  61    4.3.8 槲皮素样品的测定  61-64结论与展望  64-66  结论  64-65  展望  65-66参考文献  66-75致谢  75-76附录（作者在攻读硕士学位期间发表的学术论文）  76-77摘要  77-80ABSTRACT  80-84

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中图分类: > 环境科学、安全科学 > 环境质量评价与环境监测 > 环境监测 > 水质监测
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