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大鼠脑缺血再灌注损伤Cathepsin B介导细胞凋亡与p-mek的关系

作　者: 李小娟
导　师: 张智博
学　校: 南华大学
专　业: 神经内科
关键词: 脑缺血再灌注损伤溶酶体凋亡 Cathepsin B p-mek
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的脑缺血后半暗带区神经细胞发生以凋亡为主，挽救半暗带区神经细胞的凋亡是治疗缺血性脑血管病的关键。研究发现溶酶体组织蛋白酶B(Cathepsin B)、MEK/ERK信号通路均参与了缺血再灌注损伤后神经细胞的凋亡过程。在细胞凋亡过程中，关于二者之间是否有关系的研究较少。本实验通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，通过电镜观察半暗带区神经细胞中溶酶体的激活情况，检测Cathepsin B及p-mek蛋白的表达情况，探讨Cathepsin B与MEK/ERK信号通路的关系，为缺血再灌注损伤后神经细胞的凋亡机制提供实验依据。方法选择10-12周龄清洁级健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠69只，体重为280±20g,随机分为假手术组（Sham组，n=7），脑缺血再灌注组30min（IRI-30min，n=8）、脑缺血再灌注组2h（IRI-2h，n=8）、脑缺血再灌注组6h（IRI-6h，n=8）、脑缺血再灌注组12h（IRI-12h，n=13），U0126干预组30min（U0126-30min，n=5）、U0126干预组2h（U0126-2h，n=5）、 U0126干预组6h（U0126-6h，n=5）、U0126干预组12h（U0126-12h，n=10）。应用改良的Long线栓法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）,干预剂组在术前30分钟侧脑室穿刺注射U0126（1nmol,5ulDMSO），假手术组及模型组在术前30分钟侧脑室注入等体积的DMSO(10ml/L)。利用Longa’s的5极标准评分法评价神经功能缺损；应用TTC染色法检测脑梗死的体积变化；运用电镜观察缺血后溶酶体的形态变化；运用Western blotting法检测Cathepsin B、p-mek及Caspase3的表达情况。结果1.动物模型成功率是83.78％。U0126组12小时脑组织相对梗死面积较模型组减少。2.假手术组未见脑组织梗死灶，模型组和U0126干预组缺血侧皮质可见苍白色梗死灶，U0126干预组相对梗死面积较模型组减小（P﹤0.05），U0126干预组大鼠神经功能评分较模型组改善（P﹤0.05）。3.电镜观察模型组缺血侧大脑视前区皮质可见激活的溶酶体，溶酶体数目增多，体积增大，次级溶酶体数目增多，在再灌注后期（12h），可见凋亡的神经细胞。4.在大鼠缺血侧大脑皮质视前区， Western blotting检测假手术组可见Cathepsin B蛋白的表达，模型组Cathepsin B蛋白的表达在大鼠脑缺血再灌注30min、2h、6h呈上升趋势，6h达到高峰，12h下降，高于假手术（P﹤0.01）。干预组Cathepsin B蛋白的表达在大鼠脑缺血再灌2h达到高峰，在6h、12h表达呈下降趋势；干预组2h、6h、12h Cathepsin B的表达较模型组减少（P﹤0.05）；干预组30min Cathepsin B蛋白的表达与模型组30min Cathepsin B蛋白无明显差异（P﹥0.05）。5.在大鼠缺血侧大脑皮质视前区，Western blotting检测假手术组可见p-mek蛋白的表达，模型组p-mek蛋白的表达在2h达到高峰，在6h及12h表达呈下降趋势，较假手术组高（P﹤0.05），p-mek在干预组2h、6h、12h的表达与模型组减少（P﹤0.05）。6.在大鼠缺血侧大脑皮质视前区，缺血再灌注12h时Caspase3蛋白的表达在假手术组最低；在模型组表达最多；U0126干预组居中（P﹤0.01）。结论1.大鼠脑缺血再灌注损伤Cathepsin B参与细胞凋亡可能受p-mek的调控。2.在脑缺血再灌注损伤中，U0126通过抑制p-mek发挥抗凋亡作用，减少脑梗死体积。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
前言  9-13
材料和方法  13-23
结果  23-32
讨论  32-39
结论  39-40
参考文献  40-47
综述  47-57
参考文献  52-57
附录  57-58
成果  58-59
致谢  59

大鼠脑缺血再灌注损伤Cathepsin B介导细胞凋亡与p-mek的关系

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