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Wnt/β-catein通路对麦芽酚铝致PC-12细胞凋亡的影响

作　者: 李伟庆
导　师: 牛侨
学　校: 山西医科大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 麦芽酚铝 Wnt/β-catenin通路 凋亡
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


【目的】利用麦芽酚铝（Al（mal）3）对PC-12细胞进行染毒，从蛋白和基因的角度探讨铝对Wnt/β-catenin通路的影响，进而探讨麦芽酚铝通过Wnt/β-catenin通路致神经元凋亡的机制。【方法】1.PC-12细胞培养，分为两部分：1)第一部分设4个组，以Al（mal）3对细胞染毒，分为空白对照、100μmol/L Al（mal）3染毒组、200μmol/L Al（mal）3染毒组、400μmol/LAl（mal）3染毒组，染毒48小时；2)第二部分设5个组，分为空白对照组、DMSO对照组、单纯激动剂组、200μmol/L Al（mal）3染毒组、DMSO+200μmol/L Al（mal）3组和激动剂+200μmol/L Al（mal）3组，处理48小时。2.各项指标检测：1)CCK-8法和流式细胞术Annexin V FITC-PI染色分别检测神经细胞活力及凋亡率；2)QRT-PCR、和Elisa法检测PC-12细胞Wnt3a、Dishelleved、β-catenin、GSK-3β、 BCL-2/BAX、caspase-3mRNA及蛋白的表达。【结果】1.细胞活力结果：1)第一部分细胞：48小时染毒后PC-12细胞活力随着Al（mal）3浓度的增加逐渐降低；与空白对照组比较，低、中、高剂量组细胞活力均明显降低（P<0.05）。2)第一部分细胞：空白对照组、DMSO对照组和单纯激动剂组的细胞在处理后培养48小时，其细胞活力没有明显差别；与空白对照组相比，200μM Al（mal）3染毒组、DMSO+200μM Al（mal）3组以及激动剂+200μM Al（mal）3组细胞活力明显下降（P<0.05）；其中激动剂+200Al（mal）3组相比200μM Al（mal）3染毒组，其活力又有明显升高（P<0.05）。2.凋亡率结果：1)第一部分细胞：48小时染毒后PC-12细胞凋亡率随着Al（mal）3染毒浓度的增加逐渐上升，与空白对照组相比，三个染毒组细胞的凋亡率均明显增加（P＜0.01）；2)第二部分细胞：○1与空白对照组相比，DMSO对照组和单纯激动剂组以及激动剂+200μM Al（mal）3组的细胞的凋亡率无明显变化，而200μM Al（mal）3组和DMSO+200μM Al（mal）3组的细胞凋亡率均明显增加（P＜0.05）；○2与200μM Al（mal）3组相比，激动剂+200μM Al（mal）3组的细胞的凋亡率明显减少（P＜0.05），而DMSO+200μMAl（mal）3组凋亡率无明显变化。3.荧光定量PCR结果：1)第一部分细胞：○1随着染毒剂量的升高， BAX、caspase-3基因含量呈升高趋势，BCL-2基因含量呈下降趋势，与空白对照组相比，中、高剂量组BAX、caspase-3基因含量明显增加（p<0.05），BCL-2基因含量明显降低（p<0.05）；○2随着染毒剂量的增加，GSK-3β基因含量呈升高趋势，Wnt-3a、Dishevelled、β-catenin基因含量呈下降趋势，；与空白对照组组相比，400μM Al（mal）3组GSK-3β基因含量明显增加（p<0.05）；Wnt-3a、Dishevelled、β-catenin基因含量明显降低（p<0.05），200μM Al（mal）3组的Dishevelled基因含量也明显降低（p<0.05）。2)第二部分细胞：○1与空白对照组相比，单纯激动剂组、DMSO对照组BCL-2、BAX、caspase-3基因的表达量均无明显变化，激动剂+200μM Al（mal）3组BCL-2、caspase-3基因表达量无明显变化，BAX基因表达量有明显升高（p<0.05），200μM Al（mal）3组和DMSO+200μM Al（mal）3组，BAX、caspase-3基因的表达明显升高（p<0.05），而BCL-2的表达明显下降（p<0.05）；○2与200μM Al（mal）3组相比，激动剂+200μM Al（mal）3组BAX、caspase-3基因表达量明显降低、BCL-2基因明显升高（p<0.05），而DMSO+200μM Al（mal）3组各基因均无明显变化。4. ELISA结果：1)第一部分细胞：BAX、caspase-3蛋白的表达随着染毒剂量的增加呈升高趋势，BCL-2的表达随着染毒剂量的升高呈下降趋势，与空白对照组相比，中、高剂量组BAX、caspase-3蛋白的表达量明显增加（p<0.05），BCL-2蛋白表达量明显降低（p<0.01）；2)第二部分细胞：○1与空白对照组相比，单纯激动剂组、DMSO对照组BCL-2、BAX、caspase-3蛋白的表达量均无明显变化，激动剂+200μM Al（mal）3组BAX、caspase-3蛋白表达量无明显变化， BCL-2蛋白表达量有明显降低（p<0.05），200μMAl（mal）3组和DMSO+200μM Al（mal）3组，BAX、caspase-3蛋白的表达明显升高（p<0.05），而BCL-2的表达明显下降（p<0.05）；○2.与200μM Al（mal）3组相比，激动剂+200μMAl（mal）3组BAX、caspase-3蛋白表达量明显降低、BCL-2蛋白明显升高（p<0.05），而DMSO+200μMAl（mal）3组各蛋白均无明显变化。【结论】染麦芽酚铝可通过Wnt/β-catenin通路使PC-12细胞凋亡，而特异性激活Wnt/β-catenin通路，则可以减少麦芽酚铝引起的PC-12细胞凋亡。

全文目录


英文缩略词表  5-6
摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-14
  参考文献  12-14
第一部分 Al(mal)3对 PC-12 细胞凋亡的影响  14-29
  第一节 不同浓度染毒对 PC-12细胞各项指标的影响及神经细胞凋亡检测  14-20
    1 材料和方法  14-16
    2.结果  16-19
    3.讨论  19-20
  第二节 不同浓度 Al(mal)3染毒对 PC-12细胞凋亡相关基因和蛋白的影响  20-27
    1 材料和方法  20-23
    2. 结果  23-26
    3.讨论  26-27
  参考文献  27-29
第二部分 Al(mal)3对 Wnt/β-catenin通路的影响  29-38
  1 材料和方法  29-31
  2.结果  31-34
  3.讨论  34-36
  参考文献  36-38
第三部分 WNT通路在 Al(mal)3致 PC-12 细胞凋亡中的作用研究  38-50
  第一节 激活 WNT 通路对 PC-12细胞形态、活力以及凋亡率的影响  38-44
    1.材料和方法  38-39
    2.结果  39-44
  第二节 激活 WNT 通路对 PC-12细胞凋亡相关蛋白和基因的影响  44-49
    1 材料和方法  44
    2 结果  44-48
    3 讨论  48-49
  参考文献  49-50
综述  50-56
  参考文献  54-56
个人简历  56-57
致谢  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 卫生基础科学 > 卫生毒理
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