学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

嗜水气单胞菌J-1株不同培养条件下胞外蛋白的比较蛋白组学研究

作　者: 翟翔
导　师: 姚火春
学　校: 南京农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 培养温度培养时间胞外蛋白比较蛋白组学疫苗
分类号: S941
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 32次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila, Ah)广泛存在于自然环境中是重要的水生动物病原菌,可引起鱼类的败血症,给水产养殖业造成极大的经济损失,同时还是重要的人畜共患病病原菌,严重危害了人类的身体健康。现有的灭活疫苗和减毒活疫苗的免疫效果不够理想,因此,研发新型的亚单位疫苗成为当务之急。对于致病菌而言,胞外蛋白起着重要的作用,可以分泌到胞外直接与宿主免疫系统发生作用,诱发机体产生良好的免疫保护力。本试验以嗜水气单胞菌J-1株为研究对象,运用比较蛋白组学的技术和方法,分析不同培养条件下其胞外蛋白的差异表达谱。通过二维凝胶电泳技术,获得嗜水气单胞菌J-1株在280C和370C两个培养温度下的胞外蛋白表达谱,通过比较分析找出差异蛋白点,经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库检索,成功鉴定出8个差异蛋白,包括：丝氨酸蛋白酶、溶血素、延伸因子Tu、半乳糖ABC转运子、主要外膜蛋白、假定蛋白AHA0616和气溶素前体。其中,2个温度上调蛋白,6个温度下调蛋白。通过比较分析嗜水气单胞菌J-1株在280C培养时,8h和14h的二维电泳图谱,以及37。C培养时,8h和14h的二维电泳图谱,间接分析细菌在这两个温度条件下,对数期和稳定期胞外蛋白的差异。分别鉴定出28。C培养条件下的7个差异蛋白和37。C培养条件下的5个差异蛋白,包括：丝氨酸蛋白酶、胞外蛋白酶、核酸酶、D-核糖转运子亚基RbsB、精氨酸ABC转运子、腐胺ABC转运子、精氨酸-鸟氨酸绑定蛋白、溶血素和假定蛋白AHA0616。利用在线信号肽预测软件SignalP3.0进行分析,结果显示所有差异蛋白均含有典型的信号肽结构,从生物信息学的角度说明鉴定蛋白均为胞外蛋白。已有研究证明,本试验鉴定出的差异蛋白,如气溶素、溶血素、主要外膜蛋白、胞外蛋白酶,都是具有免疫原性的蛋白,可用于基因工程亚单位疫苗的生产制作。试验结果显示,培养温度的变化以及不同培养阶段生长环境的改变都对嗜水气单胞菌J-1株的胞外蛋白有很大影响。为今后疫苗生产过程中,通过调整培养温度和控制培养时间优化疫苗生产条件提供了理论基础。

全文目录

摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
第一篇文献综述  9-29
  第一章嗜水气单胞菌毒力因子的研究进展  9-21
    1 生物学特性  9
    2 鉴定方法  9-10
    3 毒力因子  10-14
    4 展望  14-15
    参考文献  15-21
  第二章蛋白质组学的研究进展  21-29
    1 研究方法与技术  21-24
    2 比较蛋白组学  24-25
    3 展望  25-26
    参考文献  26-29
第二篇试验研究  29-63
  第一章嗜水气单胞菌J-1株不同培养温度下胞外蛋白的比较蛋白组学研究  29-45
    摘要  29-30
    1 材料与方法  30-35
    2 结果  35-38
    3 讨论  38-41
    参考文献  41-43
    Abstract  43-45
  第二章嗜水气单胞菌J-1株不同培养时间胞外蛋白的比较蛋白组学研究  45-57
    摘要  45
    1 材料与方法  45-47
    2 结果  47-52
    3 讨论  52-54
    参考文献  54-55
    Abstract  55-57
  第三章培养温度对嗜水气单胞菌J-1株毒力的影响  57-63
    摘要  57
    1 材料与方法  57-58
    2 结果  58
    3 讨论  58-60
    参考文献  60-61
    Abstract  61-63
全文总结  63-65
附录1  65-67
附录2  67-71
致谢  71

嗜水气单胞菌J-1株不同培养条件下胞外蛋白的比较蛋白组学研究

内容摘要

全文目录

相似论文