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两种与生育有关的人精子膜蛋白基因的研究

作　者: 刘孟元
导　师: 史轶蘩；王琳芳；缪时英
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 内分泌学
关键词: 插入子精子运动单克隆抗体人精子膜阳性克隆顶体反应受体蛋白透明带缓冲液受精过程
分类号: R321
类　型: 博士论文
年　份: 1993年
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内容摘要

精子细胞膜(简称“精子膜”)蛋白在受精过程中占有十分重要的地位，尤其是对精子运动、精卵识别、融合及早期胚胎发育等起着重要的作用。因此精子膜蛋白的研究一直受到人们的极大关注。我们在国际上较早地开展了这一方面的工作。目前已分离纯化了数种家兔和人的精子膜蛋白，并制备了其单克隆抗体，利用抗体表位筛选法从大鼠和人睾丸表达型λgtll cDNA库中筛选获得了数种相应的精子膜蛋白的cDNA片段，并进行了核苷酸的序列分析。本研究是在本实验室以前工作的基础上，对两种人精子膜蛋白基因做进一步的研究，是精子膜蛋白研究课题中部分工作的继续。论文分为两部分： 1．人精子膜YWK-Ⅱ抗原的cDNA克隆、序列分析及其同源性比较本实验室过去曾用抗人精子单克隆抗体YWK-Ⅱ，从大鼠睾丸λgtll表达型cDNA库中筛选获得一个eDNA片段—RSD-2。为了进一步研究人精子中编码该蛋白基因的特征，本研究又以RSD-2为探针对人睾丸λgtll cDNA库进行筛选。所获得的7个阳性克隆其插入子的大小分别为：R171：1.2kb，R321：0.7kb，R514：0.5kb，R642：1.0kb，R721：1.8kb，R915：1.4kb和R921：1.6kb。选择其中一个克隆(R921)进行研究，首先绘制其插入子的限制性内切酶酶切物理图谱，制备测序亚克隆进行DNA序列测定分析。核苷酸序列测定根据Sanger双脱氧终止法原理，同时使用了同位素掺入的人工测序和荧光素标记的全自动测序两种方法，对各个测序片段重复测定以保证测序结

全文目录

中文摘要  4-8
英文摘要  8-12
精子膜及其特异性抗体对受精机制的影响(文献综述)  12-35
  1. 精子膜的化学组成及其在精子发育成熟过程中的变化  13-18
    1.1 精子膜的化学组成  13-15
    1.2 精子在发育和成熟过程中膜成分的动态变化  15-18
  2. 精子膜在受精过程中的变化  18-21
    2.1 精子的获能  19
    2.2 精子与卵子的相互识别、结合及顶体反应  19-21
    2.3 精子与卵子的融合  21
  3. 抗精子杭体对受精机制的影响  21-24
    3.1 对精子在雌性生殖道内运行的影响  22-23
    3.2 对精子获能和顶体反应的影响  23
    3.3 对精子穿透去透明带仓鼠卵的影响  23-24
    3.4 对精卵融合的影响  24
  4. 抗精子避孕疫苗的研究  24-35
    4.1 精子特异性抗原  24-32
    4.2 抗精子避孕疫苗的研究现状与展望  32-35
前言  35-37
材料和方法  37-55
  1. 实脸材料  38-40
    1.1 菌株  38
    1.2 载体  38
    1.3 DNA文库  38
    1.4 工具酶  38-39
    1.6 试剂盒  39
    1.6 放射性同位素  39
    1.7 主要化学试剂  39
    1.8 培养基  39
    1.9 主要仪器及材料  39
    1.10 DNA序列分析软件  39-40
  2. 实验方法  40-55
    2.1 探针的制备  40-41
    2.2 基因文库的杂交筛选  41-42
    2.3 λDNA的提取  42-43
    2.4 质粒DNA的提取与纯化  43-45
    2.5 DNA限制性酶谱分析  45
    2.6 DNA酶切片段的回收  45-46
    2.7 Southern印迹杂交  46-47
    2.8 斑点杂交  47
    2.9 基因克隆  47-49
    2.10 寡核苷酸片段的化学合成  49
    2.11 聚合酶链式反应  49
    2.12 DNA序列测定  49-53
    2.13 核苷酸序列的计算机分析  53-55
结果与讨论  55-99
  1. 人精子膜YWK-II抗原的cDNA克隆、序列分析及其同源性比较研究  56-78
    1.1 筛选用探针RSD-2的制备  56
    1.2 YWK-II抗原的cDNA克隆  56-61
    1.3 插入子的DNA序列分析  61-64
    1.4 应用不对称性PCR产物进行DNA序列测定  64-68
    1.5 HSD-2的开放阅读框架及其编码蛋白多肽的特性分析  68-71
    1.6 HSD-2及其编码多肽的同源比较  71-78
  2. 编码84kDa人精子膜蛋白基因的进一步研究  78-99
    2.1 编码84kDa人精子膜蛋白的cDNA克隆及DNA序列分析  78-88
      2.1.1 编码84kDa人精子膜蛋白的cDNA克隆  78
      2.1.2 阳性克隆插入子的DNA序列分析  78-88
    2.2 编码84kDa人精子膜蛋白基因结构的初步研究  88-99
      2.2.1 人胎盘基因组文库的筛选  89
      2.2.2 阳性克隆插入子的杂交分析及部分核苷酸序列的测定  89-99
总结  99-101
参考文献  101-110
附录一、英文缩写词  110-113
附录二、本实验主要缓冲液的配制  113-116
附录三、核酸序列测定电泳图谱  116-118
致谢  118-119
泌乳素受体的分子生物学(文献综述)  119-130

两种与生育有关的人精子膜蛋白基因的研究

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