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护卵汤对免疫性POF小鼠模型FoxP3蛋白表达的影响

作　者: 言慧
导　师: 尤昭玲
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中医妇科
关键词: 卵巢早衰 小鼠模型 自身免疫 抗透明带抗体 护卵汤 调节性T细胞 叉头状蛋白3
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 28次
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内容摘要


目的：初步探讨中药防治POF的作用和机理,为中药防治POF的提供理论和临床研究的实验数据,本研究运用现代科研方法,结合病理学和分子生物学知识,从免疫方面入手,初步探讨中药护卵汤对免疫性POF的作用机理。方法：1.采用文献检索方法,对中医药防治POF的病因病机、临床分型、治则治法以及当前研究进展进行研究分析。大量研究表明中药治疗卵巢早衰的疗效肯定,且副作用小和无耐药性,是值得深入探索的领域。2.根据POF的病理机制,用小鼠透明带ZP3第330-342个氨基酸序列(NSSSSQFQIHGPR)为免疫原建立免疫性POF小鼠动物模型,并用护卵汤对其进行干预,运用光镜、流式细胞技术、免疫组化等技术检测卵巢形态的改变、CD4+CD25+Treg和FoxP3的表达及变化。结果：1.模型组：逐渐出现动情周期紊乱,时间相对较早,动情间期延长,阴道细胞涂片主要表现为大量白细胞及少量有核上皮细胞；卵巢体积缩小,成熟卵泡少,卵泡颗粒细胞层较正常减少,排列紊乱,部分卵泡发育不良,卵巢间质可见较多淋巴细胞及浆细胞浸润；外周血中AzpAb阳性,水平升高；卵巢重量、胸腺重量指数降低,脾重指数增加；CD4+CD25+Treg细胞数量减少；FoxP3的基因和蛋白表达均减弱。2.护卵汤组：POF小鼠较上述模型组的情况均有不同程度改善,高剂量组比中、低剂量组疗效明显,具体表现为：动情周期紊乱时间出现相对晚,主要表现为动情周期延长,动情期角化细胞减少,动情周期延长至8-10d；较模型组比较,卵巢体积稍增大,发育成熟卵泡较多。卵泡颗粒细胞层增多,少部分卵泡发育不良,卵巢间质见少量淋巴细胞及浆细胞浸润。外周血中AzpAb阳性,但水平明显降低；卵巢重量、胸腺重量指数明显升高；脾重指数明显降低；CD4+CD25+Treg细胞数量增加；FoxP3的基因和蛋白表达均增强。结论：POF的主要病因病机是肾虚胞阻,补肾通络是其基本治则；本实验建立的动物模型与人POF相接近,是研究POF较为理想的动物模型；护卵汤对免疫性卵巢早衰动物的卵巢功能、免疫功能具有一定改善作用。使卵巢重量指数明显增加,卵巢有生机卵泡增多,淋巴细胞和浆细胞浸润减少。性周期表现为有规律性,只是情间期延长；对POF的免疫功能具有调节作用。使胸腺重量指数上升,脾脏重量指数、AzpAb效价下降,CD4+CD25+Treg细胞数量增加,FoxP3的基因和蛋白表达均升高从而抑制自身免疫性损伤。

全文目录


中文摘要  7-9
Abstract  9-12
英文缩略词表  12-13
引言  13-15
第一部分 护卵汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠免疫学和形态学的影响  15-23
  1.动物与材料  15-17
    1.1 实验动物  15
    1.2 试剂与药物  15-16
    1.3 主要溶液配制  16
    1.4 主要仪器  16-17
  2.实验方法  17-19
    2.1 动物模型的建立  17
    2.2 分组和给药  17-18
    2.3 阴道脱落细胞涂片观察小鼠性周期  18
    2.4 取材  18
    2.5 小鼠卵巢、脾脏重量测定  18
    2.6 卵巢组织形态学观察  18-19
    2.7 统计方法  19
  3.结果  19-23
    3.1 各组小鼠性周期的改变  20
    3.2 小鼠卵巢指数、脾脏指数  20-21
    3.3 卵巢形态学变化  21-23
第二部分 护卵汤对免疫性POF模型小鼠脾脏中CD4~+CD25~+Treg细胞的影响  23-26
  1.动物与材料  23
    1.1 动物及造模方法  23
    1.2 药物与试剂  23
    1.3 主要仪器  23
  2.实验方法  23-24
    2.1 动物模型  23
    2.2 分组和给药  23
    2.3 取材  23
    2.4 流式细胞仪检测小鼠脾脏中CD4+CD25+Treg细胞  23-24
    2.5 统计学分析  24
  3 结果  24-26
第三部分 护卵汤对免疫性POF小鼠FoxP3mRNA和蛋白表达的影响  26-30
  1.动物与材料  26
    1.1 动物及造模方法  26
    1.2 药物与试剂  26
    1.3 主要仪器  26
  2.实验方法  26-28
    2.1 动物模型  26-27
    2.2 分组和给药  27
    2.3 取材  27
    2.4 免疫组化法检测免疫性POF模型小鼠卵巢FoxP3蛋白的表达  27-28
    2.5 统计学分析  28
  3.结果  28-30
    3.1 护卵汤对免疫组化检测的FoxP3蛋白表达的影响  28-30
第四部分 讨论  30-50
  1.中医学对卵巢早衰的认识  30-42
    1.1 印粱早衰的病因病机  30-31
    1.2 卵粱早衰的辫证施治  31-34
    1.2 导师对卵粱早衰病因病机的认识和诊疗特点  34-36
    1.3 护卵汤理法方药方义分析  36-38
    1.4 护印汤单味药的性味、归经及功效  38-42
  2.关于模型的选择  42-43
  3.护卵汤对免疫性POF模型小鼠卵粱及性周期改变影响  43-45
    3.1 小鼠印粱形态学影响  43-44
    3.2 小鼠卵粱指数的影响  44
    3.3 护卵汤对免疚性POF小鼠性周期改变的影响  44-45
  4.护卵汤对免疫性PoF小鼠外周血中en4+en25+Treg的影响  45-47
  5 护卵汤对免疫性POF小鼠卵粱组织中FxoP3蛋白表达的影响  47-50
结论  50-51
致谢  51-52
参考文献  52-57
附录  57-67
  附图  57-59
  卵集早衰的中医研究进展  59-67
    参考文献  65-67
  研究生在读期间论文科研情况  67

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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