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应用UPLC-MS/MS研究林可霉素—庆大霉素注射剂在猪体内的残留

作　者: 崔阳
导　师: 李艳华
学　校: 东北农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: UPLC-MS/MS 林可霉素庆大霉素注射剂 残留 猪
分类号: R155.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


林可霉素-庆大霉素注射剂是自行研制的防治猪链球菌病的复方药物,其中林可霉素是林可胺类抗生素,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌具有很高的杀灭作用。日本肯定列表规定林可霉素在肉制品中的最高残留限量为0.2 mg/kg。庆大霉素,又名吉他霉素,属于氨基糖苷类抗生素,对革兰阳性和阴性菌均有抗菌活性,日本肯定列表在可食性组织中的最高残留限量均为0.1 mg/kg。为了保证该复方药物在猪场的规范使用,保护人类的身体健康以及畜牧业的健康发展,故应建立残留监控体系并确定其休药期。本实验建立了猪可食性组织（心脏、肝脏、肺脏、肾脏、肌肉和脂肪）中同时检查林可霉素和庆大霉素的超高效液相色谱-电喷雾串联质谱的测定方法。经2%三氯乙酸溶液提取,C18固相萃取柱净化。采用ACQUITY UPLCTM BEH C18 （2.1 mm×50 mm., 1.7μm）色谱柱,10mM七氟丁酸水溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,超高效液相色谱分离,电喷雾质谱电离,正离子多反应监测模式进行定性和定量分析。2种药物分别在0.01～2mg/kg浓度范围内线性良好,相关系数R2均大于0.999;以高、中、低三个浓度水平进行添加回收率实验,样品的平均回收率在76%～89.4%之间,相对标准偏差为8.1%～11.4%,方法检出限（LOD）林可霉素和庆大霉素分别为0.005mg/kg、0.018mg/kg。分析复方林可霉素庆大霉素注射剂在猪可食性组织中的残留消除规律发现,32头断奶后40天猪,按0.35ml/kg体重肌肉注射给药后,于停止给药后的第4、10、20、30、40、50、60天屠宰,取肌肉、肝脏、肾脏、心脏和肺脏检测。第4天时药物浓度达到最高,依次是肾脏>肝脏>肺脏>心脏>肌肉,林可霉素和庆大霉素在肾脏中的含量分别为0.098 mg/kg、490 .000mg/kg,肝脏中的含量分别为0.030mg/kg、22.700 mg/kg,肌肉中的浓度为0.006 mg/kg、1.100 mg/kg,心脏中的含量为0.008 mg/kg、2.170 mg/kg,肺脏中的含量为0.115 mg/kg、7.200 mg/kg。第60天,林可霉素和庆大霉素的残留量均低于中国和日本制定的最高残留限量。根据WT1.4软件数据处理后的计算,注射剂的休药期为76天。

全文目录


摘要  8-9
Abstract  9-11
1 前言  11-21
  1.1 食品安全及残留危害  11-12
  1.2 林可霉素的研究进展  12-13
    1.2.1 林可霉素的理化性质  12-13
    1.2.2 林可霉素的毒副作用及其危害  13
    1.2.3 林可胺类在动物体内的代谢  13
    1.2.4 林可霉素的残留现状  13
  1.3 林可霉素的样品前处理的方法  13-14
  1.4 林可霉素的残留检测方法  14-15
  1.5 庆大霉素的研究进展  15-16
    1.5.1 庆大霉素的理化性质  15-16
    1.5.2 庆大霉素的毒副作用及其危害  16
    1.5.3 庆大霉素在动物体内的代谢  16
    1.5.4 庆大霉素的残留现状  16
  1.6 庆大霉素样品前处理的方法  16-17
  1.7 庆大霉素的残留检测方法  17-18
  1.8 液相色谱串联质谱法在残留检测中的应用  18-19
  1.9 SPE 技术在兽药残留中的应用  19-20
  1.10 本研究的目的与意义  20-21
2 材料与方法  21-27
  2.1 材料  21-22
    2.1.1 实验动物  21
    2.1.2 试剂与主要溶剂配置  21-22
    2.1.3 仪器设备  22
  2.2 分析方法  22-27
    2.2.1 实验动物给药方案与样品采集  22
    2.2.2 样品预处理  22-23
    2.2.3 UPLC/MS/MS 检测方法  23-25
    2.2.4 方法学验证  25-26
    2.2.5 残留消除规律及其休药期的计算  26-27
3 结果  27-36
  3.1 UPLC-MS/MS 方法  27-30
    3.1.1 方法选择性  27
    3.1.2 标准曲线与线性范围  27-29
    3.1.3 方法检出限与定量限  29
    3.1.4 方法精密度与准确度  29-30
  3.2 林可霉素庆大霉素在猪体内的残留消除  30-36
    3.2.1 林可霉素庆大霉素在猪体内的消除规律  30-33
    3.2.2 休药期的制定  33-36
4 讨论  36-40
  4.1 质谱方法优化  36-37
  4.2 色谱条件的优化  37-38
  4.3 样品前处理  38
    4.3.1 提取溶剂的选择  38
    4.3.2 固相萃取柱的选择  38
  4.4 庆大霉素在猪体内的残留消除规律及休药期  38-40
结论  40-41
致谢  41-42
参考文献  42-45
附录  45-52
攻读硕士学位期间发表的论文  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 营养卫生、食品卫生 > 饮食卫生与食品检查 > 食品卫生与检验
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