学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

三日龄大鼠缺氧缺血脑损伤与神经功能障碍的实验研究

作　者: 黄志恒
导　师: 陈超；杨振纲
学　校: 复旦大学
专　业: 儿科学
关键词: 早产儿缺氧缺血脑损伤髓鞘认知皮层肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体神经功能
分类号: R722.6
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
下　载: 167次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：脑室周围白质损伤是早产儿主要形式的脑损伤,导致脑瘫与认知功能障碍等严重神经系统后遗症。但是早产儿脑损伤导致的髓鞘化障碍与远期认知缺陷的关系,目前国内外研究较少。本研究采用三日龄大鼠缺氧缺血(Hypoxia-ischemia, HI)脑损伤模型,评价HI后早期和晚期两个不同阶段星形胶质细胞和小胶质细胞增生对少突胶质细胞髓鞘化的影响；并进一步通过Morris水迷宫实验,评估少突胶质细胞髓鞘化与远期认知障碍的关系。方法：三日龄SD大鼠右侧颈总动脉结扎,然后置于37℃环境中,6%氧气(其余为氮气),缺氧2.5h。对照组既不结扎右侧颈总动脉,也不缺氧。①HI组与正常组大鼠(n=8只),于HI后72h(早期阶段)后进行04、胶质纤维相关蛋白(glial fibrillary acidic Protein, GFAP)、CD68免疫组化染色,观察少突胶质前体细胞表达与星形胶质细胞、小胶质细胞增生的关系。②P42的HI组(n=23只)与正常组(n=24只)大鼠,进行Morris水迷宫实验评价认知功能。③P47的HI组(n=15只)与正常组(n=11只)大鼠,进行焦油紫染色,评估神经病理学变化。④HI组与正常组大鼠(n=8只),于HI后44天(晚期阶段)进行髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein, MBP)、2’,3’-环腺苷酸-3’-磷酸二酯酶(2’,3’-cyclic nucleotide 3’-phosp-hodiesterase, CNPase)染色,评价少突胶质细胞成熟程度；同时分别进行GFAP和CD68染色,分别标记胶质增生和小胶质细胞变化情况,观察晚期阶段它们对少突胶质细胞成熟的影响。结果：①HI后72h,损伤侧白质少突胶质前体细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞数目明显高于对照侧与正常对照组(P<0.05)。②P42进行的Morris水迷宫实验中,定位航行实验结果显示,HI组大鼠学习能力明显下降,有较长的逃跑潜伏期与游泳距离；空间探索实验结果显示,HI组大鼠记忆能力明显下降,有较少的目标站台穿越次数与较低的目标象限停留时间比例。③P47大鼠神经病理结果显示,HI组损伤侧脑体积比率与胼胝体体积比率均明显减少(P<0.05)。④P47大鼠脑组织MBP、CNPase免疫组化结果显示,HI组大鼠损伤侧白质MBP阳性面积与少突胶质细胞数目均明显减少(P<0.05),同时损伤侧白质区有GFAP阳性的胶质瘢痕形成,明显高于对照侧与正常对照组(P<0.05),而CD68阳性的小胶质细胞数目在三者之间无明显差别。结论：①HI后72h,大量增生的星形胶质细胞与小胶质细胞是影响少突胶质髓鞘化的早期因素。②HI后44天,持续存在的胶质瘢痕是影响少突胶质细胞髓鞘化的晚期因素。③HI造成远期的空间认知功能障碍。④少突胶质髓鞘化障碍是影响远期认知功能障碍的重要机理之一目的：早产儿脑损伤是引起患儿伤残的重要原因。最近研究表明,早产儿脑室周围白质损伤同时伴有灰质神经元／轴突的病变,并且炎症反应是导致脑损伤的重要机理之一。肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)与其死亡受体(death receptor, DR)、诱骗受体(decay receptor, DcR)受体结合,参与中枢神经系统多种炎性反应性疾病,但是在早产儿脑损伤中尚见报道；本研究采用三日龄大鼠HI脑损伤模型,评估皮层TRAIL及其受体表达及相关的神经行为功能改变情况。方法：①三日龄SD大鼠右侧颈总动脉结扎,然后置于37℃环境中,6%氧气(其余为氮气),缺氧2.5h。对照组既不结扎右侧颈总动脉,也不缺氧。②HI后24h(急性期),HI组与正常对照组(n=8只)分别利用免疫组化染色及免疫荧光双标、Western blot、Real-time PCR等方法,从细胞水平、蛋白水平、基因水平观察TRAIL及其死亡受体DR5、Caspase-3等表达变化。③HI后7天(恢复期),HI组与正常对照组(n=8只)分别进行利用NeuN免疫组化染色,观察神经元的表达。④HI后7天(恢复期),HI组与正常对照组(n=6只),分别进行苏木素-伊红染色,观察脑组织病理学变化。⑤HI组(n=15只)与正常对照组(n=11只)分别于HI后24h、72h、5天、7天进行早期神经行为评估(步态反射、翻正反射、悬崖回避、负向趋地反射)；观察各组大鼠首次睁眼时间以评估神经发育情况；各组大鼠于P60进行T-迷宫自主交替实验,评价远期认知功能。结果：①HI后24h,免疫组化结果显示损伤侧皮层表达大量的TRAIL、死亡受体DR5、诱骗受体DcR1、DcR2阳性细胞,数目明显高于对照侧和正常对照组(P<0.05)。并且损伤侧皮层TRAIL/CD68双阳性细胞数目明显高于对照侧。②Western blot结果显示损伤侧皮层大量表达TRAIL、DR5蛋白(P<0.01)；Real-time PCR结果也显示损伤侧皮层大量表达TRAIL、DR5、Caspase-3 mRNA(P<0.01)。③HI后7天,免疫组化显示损伤侧皮层神经元数目减少、结构异常、排列紊乱。④HI后7天,HE染色显示损伤侧神经细胞固缩、细胞走向紊乱、结构欠清晰。⑤早期神经行为结果显示,HI组大鼠步态反射时间、翻正反射时间、悬崖回避反射时间、负向趋地反射时间均明显延迟(P<0.05)；其次,HI组大鼠损伤侧眼睛睁开时间明显延迟,长于对照侧和正常对照组(P<0.05)。T-迷宫自主交替实验结果显示：HI组大鼠远期空间选择的能力明显低于正常对照组(P<0.05)。结论：3日龄大鼠脑损伤急性期,HI上调皮层TRAIL及其死亡受体DR5的表达。HI引起皮层神经元的损伤中,TRAIL-DR5系统可能是重要的信号通路。HI可激活凋亡相关基因导致皮层损伤。早期皮层神经元的损伤可导致以后神经行为异常、神经发育迟缓和远期认知功能障碍。

全文目录

中文摘要  5-9
英文摘要  9-13
前言  13-15
第一部分三日龄大鼠缺氧缺血脑损伤后髓鞘化障碍与远期认知缺陷的关系  15-39
  材料和方法  16-22
  结果  22-30
  讨论  30-33
  小结  33-34
  参考文献  34-39
第二部分三日龄大鼠缺氧缺血脑损伤后TRAIL及其受体的表达与神经功能障碍的研究  39-73
  材料与方法  41-55
  结果  55-65
  讨论  65-68
  小结  68-69
  参考文献  69-73
致谢  73-74
综述  74-86
  1、感染/炎症与早产儿脑室周围白质损伤  74-80
  2、早产儿脑损伤与认知功能发育  80-86
研究生期间完成的论文及会议投稿情况  86-97

三日龄大鼠缺氧缺血脑损伤与神经功能障碍的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文