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乌头类中药呼吸系统体内外毒作用研究

作　者: 王金勇
导　师: 李宏霞
学　校: 四川大学
专　业: 卫生毒理学
关键词: 乌头类中药生川乌生草乌盐附子乌头碱氧化损伤细胞凋亡 DNA损伤
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 242次
引　用: 1次
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内容摘要

乌头类中药是药典收载的一类常用药物，具有强心、升压、镇痛、抗炎等多种药理作用，在临床治疗相应疾病中应用十分广泛。该类药物毒性很大，其中生川乌、生草乌、生附子属于国家统和心血管系统。查阅了大量国内外文献，偶有消化系统症状的病例报道，但是对于呼吸系统的毒副作用却未见报道。为了解乌头类中特殊管理的毒性中药。临床上常见因误服或过量服用乌头类中药引起中毒和死亡的报道。乌头类中药的主要毒性成分为乌头碱，其常见的毒性作用靶器官是中枢神经系药对呼吸系统的影响，本课题选用了体内试验和体外试验，研究了乌头类中药(盐附子、生川乌、生草乌)及其主要毒性成分乌头碱对呼吸系统的毒作用。体内试验包括乌头类中药(盐附子、生川乌、生草乌)SD大鼠的毒性试验和生草乌对Beagle犬呼吸系统的安全药理试验。将成都中医药大学提供的乌头类有毒中药材(生川乌、生草乌、盐附子)提取物进行了SD大鼠3个月经口给药长期毒性试验，观察给药后肺组织产生的毒性反应及其严重程度，为其临床安全用药提供参考。试验设阴性对照组、生川乌提取物高剂量组(13．0g生药／kg)、中剂量组(6．5g生药／kg)、低剂量组(3．3g生药／kg)、生草乌提取物高剂量组(8．3g生药)／kg、中剂量组(4．2g生药／kg)、低剂量组(2．1g生药／kg)、盐附子提取物高剂量组(6．18g生药／kg)、中剂量组(3．09g生药／kg)、低剂量组(1．55g生药／kg)，每组大鼠30只，雌雄各半。大鼠经口灌胃给药，连续3个月，给药结束恢复期观察1个月。试验结果显示：给药结束及恢复期结束时，生草乌高剂量组肺组织的脏器系数与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0．05)，其余给药组肺组织的脏器系数与对照组相比差异无统计学意义，但所有试验组肺脏器系数值均在正常值范围内；给药结束及恢复期结束时肺组织病理学检查未发现盐附子、生川乌和生草乌各剂量组出现明显的病变。试验结果表明：在本试验条件下，乌头类中药对肺组织无明显的毒性。Beagle犬安全药理试验设单个给药剂量组，Beagle犬在麻醉状态下经口插入胃管给予生草乌2．49g生药／kg。分别于给药前及给药后30，60，90，120，180，240min测定呼吸频率、呼吸幅度等。结果显示：给药后120min、180min、240min，雄性Beagle犬的呼吸频率加快、呼吸幅度增大，与给药前相比差异有统计学意义(P＜0．05)，但无生物学意义；雌性Beagle犬以上指标在各时间点均无明显改变。体外试验采用原代肺成纤维细胞和传代的中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL细胞)。①原代肺成纤维细胞试验：将孕19天龄胎鼠的肺组织取出，分离培养原代肺成纤维细胞，观察乌头碱(50、25、5、2．5、0．5ng／ml)染毒72h后对该细胞是否具有氧化损伤作用和促细胞凋亡的作用。结果显示：乌头碱对原代的肺成纤维细胞无氧化损伤作用和促进细胞凋亡的作用。②中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL细胞)试验：乌头碱的终浓度分别为100、50、25、5μg／ml，染毒2h。结果显示：在加与不加体内代谢活化系统S9混合液的情况下，乌头碱100μg／ml和50μg／ml组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照之间差异有统计学意义(P＜0．05)，乌头碱各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长存在剂量反应关系，说明乌头碱对CHL细胞有DNA损伤作用。综合以上体内和体外试验结果，可以得出如下结论：在本实验室条件下，盐附子提取物(6．18、3．09、1．55g生药／kg)、生川乌提取物(13．0、6．5、3．3g生药／kg)、生草乌提取物(8．3、4．2、2．1g生药／kg)对大鼠肺组织无明显毒作用；生草乌(2．49g生药／kg)可导致雄性Beagle犬呼吸频率加快，呼吸幅度增大。乌头碱(50、25、5、2．5、0．5ng／ml)对原代肺成纤维细胞无氧化损伤和促进细胞凋亡作用；乌头碱(100、50μg／ml)对CHL细胞有DNA损伤作用。

全文目录

中文摘要  6-9
英文摘要  9-12
前言  12-16
  1 研究背景  12-14
  2 研究目的  14
  3 研究内容  14-15
  主要技术路线  15-16
第一部分乌头类中药对动物呼吸系统毒性的研究  16-26
  1 SD大鼠3月经口给药毒性试验  16-21
    1.1 试验目的  16
    1.2 材料  16
    1.3 方法  16-17
    1.4 剂量设计与指标观察  17-18
    1.5 结果  18-21
  2 Beagle犬呼吸系统安全药理试验  21-24
    2.1 试验目的  21
    2.2 材料  21
    2.3 方法  21-22
    2.4 剂量设计与指标观察  22-23
    2.5 结果  23-24
  3 讨论  24-25
  4 小结  25-26
第二部分乌头碱对大鼠胚肺成纤维细胞的毒性研究  26-45
  1 目的  26
  2 材料  26-27
    2.1 实验动物  26
    2.2 主要仪器  26-27
    2.3 主要试剂  27
  3 试剂配制  27-30
    3.1 培养基的配制  27-28
    3.2 0.05%I型胶原酶溶液配制  28
    3.3 0.25%胰蛋白酶溶液配制  28
    3.4 PBS溶液配制  28
    3.5 100×双抗溶液的配制  28-29
    3.6 红细胞裂解液的配制  29
    3.7 乌头碱纯品溶液的配制  29
    3.8 MDA试剂的配制  29-30
  4 细胞培养  30-35
    4.1 动物交配  30
    4.2 胎肺成纤维细胞的原代培养  30-35
  5 指标检测与统计分析  35-39
    5.1 细胞鉴定(免疫细胞化学染色—SP法)  35-37
    5.2 细胞氧化损伤的检测(MDA检测)  37-38
    5.3 用流式细胞术检测细胞凋亡  38
    5.4 统计分析与结果判定  38-39
  6 结果  39-41
    6.1 形态学鉴定  39
    6.2 免疫细胞化学染色(SP染色)鉴定  39
    6.3 MDA检测结果  39-40
    6.4 流式细胞检测细胞凋亡结果  40-41
  7 讨论  41-44
    7.1 成纤维细胞鉴定  41-42
    7.2 MDA在细胞氧化损伤中的意义  42-43
    7.3 细胞凋亡率在细胞氧化损伤的意义  43-44
  8 小结  44-45
第三部分彗星实验检测乌头碱对中国仓鼠肺成纤维细胞的毒作用研究  45-51
  1 目的  45
  2 材料  45-46
    2.1 受试细胞  45
    2.2 受试药物  45
    2.3 主要仪器  45
    2.4 主要试剂  45-46
  3 方法  46-47
    3.1 试剂和受试药物的配置  46
    3.2 细胞培养  46
    3.3 SCGE试验  46-47
  4 观察指标  47-48
    4.1 拖尾细胞率  47-48
    4.2 拖尾细胞尾长  48
  5 统计分析与结果判定  48
  6 结果  48-49
  7 讨论  49-50
  8 小结  50-51
全文小结  51-53
参考文献  53-56
文献综述  56-73
试验图片  73-80
附录  80-81
致谢  81

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