学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

TNF-α诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖相关机制的研究

作　者: 李俊松
导　师: 肖卫国
学　校: 中国医科大学
专　业: 内科学
关键词: 肿瘤坏死因子-α 成纤维样滑膜细胞 受体 类风湿关节炎 增殖
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 195次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种常见的以关节滑膜慢性炎症性病变为主要表现的自身免疫性疾病，其病理特征主要表现为，滑膜组织异常增生，炎性细胞浸润，新生微血管数量明显增加，血管翳形成，最终侵蚀关节软骨和骨，造成关节破坏。目前认为，滑膜增厚的主要原因是由于成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes，FLS)的过度增生。且研究发现，增生的成纤维样滑膜细胞在功能上处于异常活跃状态，它可以分泌多种促炎性细胞因子、生长因子、趋化因子、基质蛋白酶等，并具有转化特性，对骨与软骨组织造成侵蚀，加速RA关节破坏。因此，阻止成纤维样滑膜细胞的增生和活化，对控制RA的发病和病情进展有重要的意义。TNF-α(Tumor necrosis factor-alpha)是一种多效性细胞因子，由活化的单核巨噬细胞产生，由于组织特异性的不同，TNF-α对大多数肿瘤细胞表现为促凋亡作用，而对于T淋巴细胞、B细胞、胸腺细胞则表现为促增殖作用。在RA的FLS上，TNF-α表现为促增殖作用，但具体机制尚不完全清楚。TNF-α主要通过和不同细胞表面受体结合发挥其生物学作用，TNF-α有两个受体，分别为TNFRⅠ和TNFRⅡ，属Ⅰ型膜蛋白，为肿瘤坏死因子受体家族，二者的胞外结构域有28％的同源性，但胞内结构域明显不同，TNFRⅠ胞内具有死亡结构域，而TNFRⅡ却不含死亡结构域，TNFRⅠ几乎在所有的细胞上都有表达，但TNFRⅡ只在免疫系统的细胞及内皮细胞上表达，分别独立或共同介导不同的信号传导通路。因为TNF-α是通过其受体发挥作用的。在我们的实验研究中，我们设想通过用一定浓度的TNF-α作用于RA成纤维样滑膜细胞，来观察RA成纤维样滑膜细胞上TNFRⅠ和TNFRⅡ表达比例的变化，进一步探讨TNF-α诱导RA FLS增殖的可能机制。方法1、类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的原代培养：在无菌条件下取得新鲜的RA滑膜组织，胶原酶消化法分离纯化滑膜成纤维细胞，实验用3-7代细胞。2、TNF-α作用RA FLS后，HE染色，观察FLS形态学的变化。3、MTT实验观察不同浓度的TNF-α对RAFLS增殖的影响。4、RT-PCR实验观察一定浓度的TNF-α作用于RA FLS后，FLS上TNFRⅠ和TNFRⅡ的mRNA表达比例的变化。结果1、RA FLS的形态学观察：20ng／ml的TNF-α持续作用RA FLS48h后，HE染色，与对照组(0ng／ml)相比，在相差显微镜下观察细胞形态。可见给予20ng／mlTNF-α的FLS细胞密度增加，但细胞形态未见明显改变，细胞呈束状排列，相差显微镜下见细胞形态以梭形为主，两极胞突细长，苏木素-伊红染色高倍镜下多数细胞核巨大呈圆形或椭圆形，核仁明显，核仁数目1-3个不等。2、不同浓度的TNF-α对RAFLS增殖的影响：不同浓度的TNF-α对RAFLS作用72小时后，MTT实验结果显示，TNF-α1ng／ml浓度组FLS的增殖率与对照组(0ng／ml)相比差异不显著，余各浓度组所对应的FLS增殖率与对照组相比均差异显著(P＜0.01)，且TNF-α在10ng／ml时，增殖作用达高峰，这种促增殖效应在一定范围内有剂量依赖性。3、RT-PCR半定量分析结果显示：当未给予TNF-α刺激时，RA FLS的TNFRⅠmRNA的表达水平明显高于TNFRⅡmRNA，TNFRⅠ／TNFRⅡ的比值为2.449。在给予TNF-α(10ng／ml)诱导下，6 hTNFRⅠ／TNFRⅡ的比值为1.461，12hTNFRⅠ／TNFRⅡ的比值为0.951，24hTNFRⅠ／TNFRⅡ的比值为0.512，降至最低，48hTNFRⅠ／TNFRⅡ的比值为0.648，可见随着时间改变，TNFRⅠ和TNFRⅡ的mRNA表达比例发生改变，TNFRⅠ表达下调，TNFRⅡ表达上调，在24h达高峰，表现出时间依赖效应。结论1、TNF-α在体外具有抑制RAFLS凋亡，促进FLS增殖作用。2、TNF-α在体外可能通过上调TNFRⅡ表达，下调TNFRⅠ表达，使RA FLS凋亡减低，促进了RA滑膜组织的增殖。

全文目录


一、摘要  5-11
  中文论著摘要  5-8
  英文论著摘要  8-11
二、英文缩略语  11-12
三、论文  12-24
  前言  12-13
  材料与方法  13-16
  实验结果  16-20
  讨论  20-23
  结论  23-24
四、本研究创新性的自我评价  24-25
五、参考文献  25-27
六、附录  27-38
  综述  27-37
  致谢  37-38
  个人简历  38

相似论文

  1. 天然迈克尔反应受体分子的快速发现及活性研究,R284
  2. Pin1在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞周期的影响,R738.1
  3. 酮色林对炎性痛和神经病理性痛的治疗作用及其机制,R741
  4. 周乃玉学术思想和临床经验总结及“痹玉康Ⅰ号”方治疗中晚期寒湿痹阻型类风湿关节炎的临床研究,R259
  5. 塞来昔布与β-榄香烯联合给药的抗肿瘤作用及其机制研究,R96
  6. 冷却分割猪肉中腐败微生物分离鉴定与生长特性的研究,R446.5
  7. 红笛鲷清道夫受体B型Ⅰ类和抗冻蛋白Ⅱ型基因的克隆、表达与定量分析,S917.4
  8. 害虫捕食性天敌拟环纹豹蛛烟碱型乙酰胆碱受体毒理学特性研究,S476.2
  9. 一个油菜菌核病抗病相关基因的功能初步分析,S435.654
  10. 牛蒡子苷提取、纯化及其对小鼠C2C12细胞生长的影响,S853.7
  11. PRRSV的感染差异性和抗体依赖性增强作用研究,S858.28
  12. IBDV配体表位P22/P221多肽合成功能鉴定及对CEF细胞文库的筛选,S852.65
  13. 烟粉虱田间种群抗药性监测及BtGluClα1基因组结构的分析,S433
  14. 马铃薯甲虫对4种新烟碱类杀虫剂的敏感性变化及其机理,S435.32
  15. 八种昆虫转录组数据中OBP、CSP和RyR基因预测及序列分析,S433
  16. 烟夜蛾气味受体基因和精氨酸激酶基因的克隆与表达分析,S433.4
  17. 几种新型杀虫剂对马铃薯甲虫的毒力及两类靶标的分子克隆,S435.32
  18. 茉莉离体快繁体系的建立,S567.239
  19. 绿茶提取物EGCG抗乙型肝炎病毒的分子机理研究,R285
  20. 类固醇激素合成酶及相关受体表达与猪卵泡闭锁过程的关系研究,S828
  21. PCV2分离株增殖特性研究及板蓝根多糖、黄芪多糖对PCV2体外复制的影响,S858.28

中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病 > 自身免疫性疾病、结缔组织疾病 > 类风湿性关节炎
© 2012 www.xueweilunwen.com