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超高压对柯萨奇病毒B_3的影响

作　者: 郑贤红
导　师: 李凡
学　校: 吉林大学
专　业: 微生物学
关键词: 柯萨奇病毒B3 超高压疫苗
分类号: R373
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

柯萨奇病毒（Coxackievirus）属于小核糖核酸病毒科肠道病毒属，能够引起呼吸道感染到心肌炎、心包炎及神经系统的一些疾病，可导致新生儿死亡。目前，控制柯萨奇病毒感染的主要方法为流行病学监测，尚没有疫苗用于预防。本文旨在通过实验证实用超高压(High hydrostatic pressure)技术制备柯萨奇病毒疫苗的可行性。1、CB3V（柯萨奇病毒B3）对超高压的抵抗力较强。超高压达到680Mpa时仍保持毒力，超高压超过700Mpa时被完全灭活。用低于700Mpa超高压灭活病毒所需的时间延长，如用600Mpa施压1小时病毒毒力没有降低，时间延长至5小时CB3V被灭活。CB3V对超高压的抵抗力较高的原因为：第一，CB3V属无包膜病毒，核衣壳是它的病毒体，结构中没有来源于宿主细胞膜的包膜，包膜本身对理化因素非常敏感。因此它对超高压极不敏感。第二，CB3V病毒颗粒小，病毒体大小只有23-30nm。D.W.Bradley(35)等认为超高压对较大的病毒可能更为有效，相反对于极小的病毒需要更大的超高压。2、超高压处理的CB3V的免疫原性没有改变，对小鼠的非特异性及特异性免疫功能均有影响。非特异性免疫是机体免疫系统的重要组成部分，单核巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的指标之一。超高压处理CB3V，可增强小鼠巨噬细胞吞噬功能，促进PGE2的合成和释放。超超高压处理的CB3V通过增加分泌PGE2（前列腺素E2）对小鼠的免疫功能进行调节，使加强的免疫功能既保护了机体免受病原生物的侵袭，又抑制过强的免疫应答对机体的损伤。酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunoadsorvent assay, ELISA）和微量中和抗体试验(microclture neutralization antibody test)显示，超高压处理的CB3V对小鼠的B淋巴细胞功能具有促进作用。B淋巴细胞在抗原的刺激下通过产生不同类型的抗体，如IgM、IgA、IgE及IgG，中和与清除病原微生物及其产生<WP=41>的毒素，在预防胞外感染及随后的症状中起主导作用。用超高压处理的病毒免疫小鼠后，血清特异性抗体产生滴度与正常小鼠之间存在显著性差异（P﹤0.05），表明超高压处理的CB3V对小鼠体液免疫功能有促进作用，中和抗体产生比较缓慢。超高压处理的CB3V能促进小鼠特异性T淋巴细胞的转化。用超高压处理的病毒免疫的小鼠体内淋转率高于正常鼠，说明小鼠的细胞免疫功能有一定的加强。用700Mpa加压30min的灭活CB3V对淋巴细胞的转化率高于其他组小鼠，分析认为：（1）CB3V的核酸为单正链（+SSRNA），具有感染性。裸露的RNA特异的感染性大约是毒粒的十万分之一倍，这一感染的确是由游离的RNA引起，不受活病毒毒粒影响 (2)。病毒RNA的感染性需要其完整性，只要有一点RNA断开或打碎，无论是游离的，还是在病毒的毒粒中都可以破坏其RNA的感染性。超高压处理的CB3V的衣壳虽然出现不连续、不规则、聚集等现象，但对病毒的保护作用依然存在。病毒核酸在超高压作用下发生合成反应以及裂解反应的可能性很小，只能发生空间立体构像的改变，如立体结构的左右旋的变化，这种改变虽然引起病毒对宿主细胞致病性的降低或消失，但是核酸的硷基链保持其完整性，RNA水解酶的作用部位没有暴露，不发生RNA酶水解反应，CB3V的RNA依然存在于体内，被机体细胞免疫系统的免疫细胞识别，产生对该病毒的免疫应答。许多体液性免疫分子参与机体的免疫应答过程。其中细胞因子作为免疫活性细胞间相互作用的介质，对于免疫反应的发生、调节及效应均起重要作用。白介素-1（IL-1）主要由激活单个核吞噬细胞、树突状细胞、表皮细胞、上皮细胞产生。IL-1具有多种生物学功能，是重要的免疫调节因子，它对机体既可增强防御能力，又可产生损害作用，是炎症的关键介质。通过IL-1的检测，能够了解超高压处理的CB3V对机体的免疫调节能力和对小鼠机体的炎性刺激程度。Il-1检测结果显示小鼠体内IL-1的量极低，各组间没有差异。白介素-2（IL-2）是由T细胞和NK细胞产生的15.5KU的糖蛋白，在机体<WP=42>的免疫应答中起重要作用。其最重要的作用是诱导T淋巴细胞增殖，增强CTL的细胞毒活性，能诱导NK细胞增殖，增强NK细胞的活性，诱导LAK细胞和TIL，并刺激它们产生细胞因子[21]。由于IL-2的含量与机体的免疫功能有关，尤其是与细胞免疫功能密切相关，因此可将IL-2的产生作为细胞免疫效应的主要指标。检测结果显示各组间差异不明显。超高压处理的CB3V的免疫原性没有减弱，具有良好的促进非特异性免疫功能和特异性免疫功能的作用。用不同的超高压力可降低病毒毒力或灭活病毒。应用超高压生产的疫苗与减毒疫苗、化学灭活疫苗、亚单位疫苗相比有一定的优势（24）。超高压处理作为纯粹的物理方法，瞬间压缩、作用均匀、操作安全、耗能低，有利于生态环境的保护和可持续发展战略的推进。同时，生产工艺简洁，污染机会相对减少，产品的卫生水平高(40)。在制备微生物制品时既不需要添加其他对人体有害的化学物质，也没有表面抗原决定簇的过度变性，是制备疫苗行之有效的好方法。

全文目录

提要  4-5
绪论  5-12
英文缩写词  12-13
第一部分材料与方法  13-22
第二部分实验结果  22-32
  一、超高压对病毒的影响  22-23
  二、超高压处理的CB3V对小鼠免疫功能的影响  23-26
  三、抗体水平检测结果  26-28
  四、中和抗体检测结果  28
  五、 T淋巴细胞转化试验  28-29
  六、 PGE2的检测结果  29-30
  七、 IL-1检测结果  30-31
  八、 IL-2的检测结果  31-32
第三部分讨论  32-36
小结  36-37
参考文献  37-40
中文摘要  40-43
英文摘要  43-48
致谢  48

超高压对柯萨奇病毒B_3的影响

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