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高强度聚焦超声制备DC瘤苗及其治疗作用和促肿瘤凋亡作用的实验研究

作　者: 杨雪
导　师: 叶欣
学　校: 泰山医学院
专　业: 老年医学
关键词: 树突状细胞 高强度聚焦超声 剂量 肿瘤抗原 肿瘤疫苗 治疗作用 凋亡
分类号: R73-36
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


目的：①建立体外大量扩增小鼠树突状细胞(dendritic cell DC)的方法；②应用高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound HIFU)辐照肿瘤细胞获取肿瘤抗原并致敏DC,制备DC肿瘤疫苗；观察此方法制备的DC瘤苗对已接种肿瘤细胞小鼠的主动治疗作用。③观察肿瘤细胞的凋亡情况,并初步探讨其治疗机理,从而为研究临床肿瘤的治疗寻求新的途径,也为肿瘤疫苗的研制开拓新的思路,同时为HIFU开辟新的应用领域。方法：①应用10ng/ml的白介素-4(interleukin, IL-4)和10ng/ml的粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)联合诱导培养小鼠骨髓细胞,光镜及电子显微镜观察DC发育过程中形态学变化；流式细胞术检测DC表面分子CD80、CD86、H-2Kd及I-Ad的表达情况；②应用不同剂量的HIFU辐照体外培养的CT-26肿瘤细胞后,用台盼兰染色、MTT法测定活细胞数,观察肿瘤细胞存活率,并观察细胞的形态学变化,从而找出致制备肿瘤抗原的工作剂量。③用剂量(1000W/cm2×30s)的HIFU辐照体外培养的CT-26肿瘤细胞后,制备出肿瘤抗原并致敏DC,制备DC瘤苗。④DC瘤苗的治疗作用的观察研究：设立HIFU辐照组(A组),反复冻融组(B组),单纯DC组(C组),以及阴性对照组(D组)。正常BALB/c小鼠皮下接种活的CT-26结肠癌细胞(5×105/只),7天后分别经皮下注射HIFU辐照制备的DC瘤苗,反复冻融制备的DC瘤苗,单纯的DC细胞,以及等量的无血清培养液治疗小鼠。一周后以相同剂量加强治疗。7天后处死部分老鼠取出肿瘤测量肿瘤重量、小鼠祛瘤净重和肿瘤体积,剩余小鼠用于观察肿瘤生长情况及生存时间、生存率等。比较各组有无差异。⑤DC瘤苗促肿瘤细胞凋亡作用的观察研究：剥离的小鼠肿瘤分别制成单细胞悬液和组织切片,分别采用AnnexinⅤ-FITC/PI、TUNEL法对肿瘤细胞的凋亡情况进行测定,比较各组有无差异。结果：①用IL-4联合GM-CSF培养小鼠骨髓细胞3天后,可见细胞形态发生改变,细胞形态不规则,并呈簇生长。培养第6～8天,细胞表面出现较多毛刺样突起,拉长,为典型的DC特征。流式细胞仪检测DC表面分子有CD80、CD86、H-2Kd及I-Ad表达；②应用不同剂量的HIFU辐照小鼠CT-26结肠癌细胞时,随着HIFU辐照剂量的增加,肿瘤细胞存活率迅速减低,肿瘤细胞的碎片逐渐增多。超声剂量为1000W/cm2×30秒时,细胞全部死亡,失去细胞形态并全部被撕裂成碎片。因此,选用1000W/cm2×30秒作为制备肿瘤细胞裂解液(肿瘤细胞抗原)的工作剂量。③HIFU辐照组、反复冻融组分别与单纯DC组、阴性对照组比较肿瘤重量、体积、小鼠的净重等差异均有显著性意义(P<0.01或P<0.05)；HIFU辐照组、反复冻融组分别与单纯DC组、阴性对照组比较小鼠的生存时间和生存率,差异具有显著性意义(P<0.01或P<0.05)；HIFU辐照组与反复冻融组比较肿瘤重量、体积等差异亦有显著性意义(P<0.01或P<0.05)、HIFU辐照组与反复冻融组比较小鼠的净重、小鼠生存时间和生存率异亦无显著性意义(P>0.05)。④HIFU辐照组、反复冻融组分别与单纯DC组、阴性对照组比较肿瘤细胞凋亡情况差异亦有显著性意义(P<0.01或P<0.05)。HIFU辐照组与反复冻融组比较肿瘤细胞凋亡情况差异亦有显著性意义(P<0.05)。说明HIFU辐照法制备的DC瘤苗和的反复冻融法制备的DC瘤苗均具有抵抗肿瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡,从而治疗肿瘤的作用,而且前者由于后者。结论：①应用IL-4联合GM-CSF培养小鼠骨髓细胞,可大量扩增成熟DC,培养的DC符合其自身的特性。②HIFU能灭活肿瘤细胞且能破碎肿瘤细胞,1000W/cm2×30s可作为制备肿瘤细胞抗原的工作剂量。此方法获取的肿瘤抗原可有效地致敏DC,制备DC瘤苗。③HIFU辐照法制备的肿瘤疫苗对小鼠肿瘤有一定的治疗作用,可以促进肿瘤细胞的凋亡,并优于反复冻融组制备的肿瘤疫苗。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-8
符号说明  8-9
第一部分 小鼠骨髓树突状细胞的诱导及鉴定  9-15
第二部分 高强度聚焦超声制备肿瘤抗原的剂量学研究  15-21
第三部分 HIFU制备DC瘤苗及DC瘤苗治疗作用的研究  21-30
第四部分 HIFU制备的DC瘤苗促肿瘤细胞凋亡作用的研究  30-34
附图表  34-48
参考文献  48-53
综述  53-60
  参考文献  58-60
致谢  60-61
攻读学位期间发表的学术论文目录  61-62

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 肿瘤学实验研究 > 治疗实验
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