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麦胚无细胞蛋白合成系统表达恶性疟原虫环子孢子蛋白的研究

作　者: 韩静
导　师: 叶嗣颖
学　校: 华中科技大学
专　业: 病原生物学
关键词: 恶性疟原虫环子孢子蛋白麦胚无细胞蛋白合成系统疟疾疫苗
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

疟原虫环子孢子蛋白(CSP)蛋白是平均分布在疟原虫子孢子上的一层表被蛋白,是恶性疟原虫子孢子时期的重要保护性抗原,也是疟疾疫苗研究中的重要候选抗原之一。然而因该蛋白结构复杂,至今尚无合适的蛋白合成系统表达和制备出理想的重组CSP作为疟疾疫苗应用。麦胚无细胞蛋白合成系统属于无细胞合成系统中的真核蛋白合成系统,是不同于基于细胞的蛋白合成系统的一种新的蛋白合成体系,可克服迄今其他各种基因工程蛋白合成技术所存在的缺点,国外已有学者在进行使用麦胚无细胞蛋白合成系统表达疟原虫蛋白的研究,已有文献支持该系统在疟原虫蛋白的表达上具有独有的优越性,所以本课题运用该系统合成恶性疟原虫CSP,以探讨其作为疟疾疫苗的可行性和为新型疟疾疫苗研究建立基础。目的:应用麦胚无细胞蛋白合成系统表达出具有生物活性的恶性疟原虫CS蛋白。方法:依据PlasmoDB上查得的恶性虐原虫Pf3D7株CSP基因序列,设计一对引物,经PCR扩增出CSP基因全序列。用NcoI与SmaI DNA内切酶双酶切PCR产物后,与同样双酶切的pIVEX 1.3WG载体连接,转化大肠杆菌DH5а株,获得pIVEX WG 1.3-CSP表达质粒。常规方法对质粒进行鉴定和DNA测序分析。将pIVEX WG 1.3-CSP质粒加入到麦胚无细胞蛋白合成系统进行表达,优化不同表达条件,对表达产物进行原虫蛋白部分性状鉴定与分析。结果:PCR成功扩增出CSP基因序列;成功构建了用于麦胚无细胞系统的pIVEX WG 1.3-CSP真核表达质粒;该重组质粒在麦胚无细胞蛋白合成系统中成功地表达出了重组恶性疟原虫CS蛋白,经鉴定,表达产物的可溶性为100%;结论:使用麦胚无细胞蛋白合成系统能够表达出完全可溶的重组CS蛋白。但关于无细胞系统表达的疟疾重组蛋白质的纯化问题,尚需要进一步的研究。

全文目录

英文缩略词  5-7
中文摘要  7-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-13
材料与方法  13-26
实验结果  26-34
讨论  34-37
参考文献  37-41
综述  41-52
  参考文献  48-52
致谢  52

麦胚无细胞蛋白合成系统表达恶性疟原虫环子孢子蛋白的研究

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