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人参皂甙Rg3对人食管癌EC-9706细胞及内源性VEGF的影响

作　者: 吴海燕
导　师: 樊青霞
学　校: 郑州大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 20(R)-人参皂甙Rg3 食管癌 血管内皮生长因子 增殖 凋亡
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的恶性肿瘤是目前危害全球人类健康的主要疾病,其发病率和死亡率都呈明显的逐年增加的趋势。在众多的恶性肿瘤中,食管癌是最常见的一种,而我国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家。在我国每年死于肿瘤的人群中,胃癌居于首位,而食管癌将近占到全部死亡人数的四分之一,仅仅次于胃癌而居于第2位。食管癌对我国国民的危害不仅仅是夺去了患者的生命,还在于它同时给患者带来的严重的躯体痛苦,巨大的精神压力和很重的经济负担。因此,对于我们医务工作者来说,竭尽全力研究和提高食管癌的治疗水平是当务之急。目前,食管癌的治疗方法主要包括手术、化疗、放疗和生物免疫治疗等多种措施,但一半以上的食管癌患者就诊时已属晚期,手术及放疗难以达到满意的效果所以,对降低食管癌复发和转移的机制和药物的研究及新的治疗策略的探索具有重大的意义。近几年来,中草药因其能全面调理且不良作用小的特点越来越受到人们的重视。新近开发的抗肿瘤中草药中,人参便是其中之一。人参是我国传统中药中的珍品,目前的研究发现除了具有延缓衰老、增加智力、增加机体免疫力等重要药效外其抗肿瘤的作用也逐渐被人们所发现。近年来,多项研究发现,人参皂甙具有抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞转移及诱导恶性细胞分化等作用而受到人们的广泛关注。尤其以人参皂甙Rg3的抗肿瘤作用最为明显。20（R）-人参皂甙Rg3（Rg3）是从红参中微量提取出的一种有效单体,它与20（S）-人参皂甙Rg3是同型异构体,它的降解产物是20（R）-人参皂甙Rh2。虽然三者相似,但以20（R）-人参皂甙Rg3的抗肿瘤作用最为明显。本研究主要通过MTT法、流式细胞术及免疫细胞化学等方法检测中药20（R）-人参皂甙Rg3（Rg3）对人食管癌EC-9706细胞增殖、凋亡、周期及其内源性VEGF的影响,从而探讨20（R）-人参皂甙Rg3（Rg3）抑制该细胞生长、转移潜能和抑制肿瘤血管生成的可能机制,为20（R）-人参皂甙Rg3（Rg3）临床治疗食管癌提供新的理论依据和实验依据。方法培养人食管癌细胞株EC-9706,采用3个药物浓度（Rg3）（50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l）和2个时间点（24h和48h）对其进行干预,主要通过光学显微镜观察3个浓度Rg3作用的EC-9706细胞的形态学改变;MTT法检测3个浓度Rg3对EC-9706细胞增殖的影响;流式细胞仪观察3个浓度Rg3对EC-9706细胞周期和凋亡的影响;免疫细胞化学方法检测3个浓度Rg3对肿瘤细胞内源性VEGF的影响。结果光学显微镜下观察3个浓度Rg3作用后,EC-9706细胞失去肿瘤细胞的多角性,不规则性,细胞边缘变钝、变圆,细胞折光性下降,变暗,漂浮的死细胞逐渐增多;MTT法检测显示3个浓度的20（R）-人参皂甙Rg3（Rg3）对人食管癌细胞株EC-9706的增殖均有明显的抑制作用,且呈明显的时间依赖性和剂量依赖性,24 h的IC50为131.7μmol/l,48 h的IC50为81μmol/l。流式细胞术检测表明3个浓度的Rg3作用该细胞48h后能诱导其发生细胞凋亡和调节细胞周期:Rg3作用48h后S期的细胞比率增加,G0/G1的细胞比率下降,将此肿瘤细胞阻滞于S期;Rg3能使此细胞产生明显的凋亡,凋亡率为分别为8.1%、9.7%、13.8%,而对照组无凋亡。免疫细胞化学技术的结果证实,Rg3能明显的抑制此肿瘤细胞内源性VEGF的表达,且抑制作用随药物浓度的增加而增加。结论适当浓度的20（R）-人参皂甙Rg3（Rg3）作用人食管癌细胞株EC-9706后一定时间,可明显抑制此细胞的增殖,且抑制作用呈明显的时间和剂量依赖性;Rg3作用后可促进此肿瘤细胞的凋亡,其促进凋亡的作用随Rg3药物浓度的增加而增加Rg3能阻止此肿瘤细胞DNA的合成,将细胞阻滞于S期,从而抑制EC-9706细胞的增殖,且抑制作用随Rg3浓度的增加而增加。Rg3能抑制人食管癌EC-9706细胞内源性VEGF的表达,其抑制作用随Rg3浓度的增加而增加。本实验结果尚不能表明20（R）-人参皂甙Rg3抑制肿瘤血管的生成的作用是通过抑制其内源性VEGF的途径来实现的。

全文目录


摘要  3-6
Abstract  6-9
论文部分 人参皂甙Rg3对人食管癌EC-9706细胞及内源性VEGF的影响  9-24
  前言  9-12
  材料和方法  12-15
  结果  15-18
  讨论  18-20
  结论  20-21
  参考文献  21-24
综述 人参皂甙Rg3抑制肿瘤血管增殖机制的研究  24-47
  参考文献  39-47
英文缩写词  47-48
致谢  48

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