肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡作用;并探讨其作用机制是否涉及耗竭细胞谷胱甘肽(glutathione, GSH)。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞和" />
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芹菜素与TRAIL合用对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

作　者: 李超
导　师: 黄秋林
学　校: 南华大学
专　业: 外科学
关键词: 肝癌 芹菜素 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 增敏作用 凋亡 谷胱甘肽
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的研究芹菜素(apigenin, API)增敏凋亡诱导配体 的学位论文">肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡作用;并探讨其作用机制是否涉及耗竭细胞谷胱甘肽(glutathione, GSH)。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞和人胚肝L-02细胞; MTS比色法测定细胞活性;碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色流式细胞术(flow cytometry, FCM)分析细胞凋亡率(Sub G1细胞百分率);酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific proteases, caspase-3)活性;分光光度法(spectrophotometry)检测细胞内GSH含量;异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记死亡受体-5(Death receptor 5, DR5)抗体FCM分析细胞DR5表达水平。结果MTS比色法测定结果显示:单用5.0μmol/L API以及单用TRAIL(在10～1000ng/mL浓度范围内)作用24 h,抑制Hep G2细胞活性作用微弱,与溶媒对照组比较差异无统计学显著意义。5.0μmol/L API预孵育1 h,10～1000ng/mL TRAIL作用24 h,抑制Hep G2细胞活性作用显著增强(P<0.05);然而,对L-02细胞活性抑制作用微弱。PI染色FCM分析结果表明:单用5.0μmol/L API和100 ng/mL TRAIL以及两者合用处理24 h,Hep G2细胞的凋亡率分别为2.44%±0.34%、2.36%±0.08%和30.23%±4.89 %;L-02细胞的凋亡率分别是0.36%±0.07%、0.37±0.03%和0.37±0.03%。ELISA测定细胞caspase-3活性结果发现:在Hep G2细胞系,5.0μmol/L API和100 ng/mL TRAIL合用显著增强诱导caspase-3激活(P<0.05),caspase-3特异抑制剂(10μmol/L Ac-DEVD-CHO)能有效阻断两者合用激活caspase-3作用(P<0.05);在L-02细胞系,5.0μmol/L API和100 ng/mLTRAIL无任单用亦或合用对细胞caspase-3活性的影响小。分光光度法检测细胞内GSH含量结果证明:在5.0μmol/L～20.0μmol/L浓度范围内,API以浓度依赖方式降低Hep G2细胞内GSH含量(P<0.05);而对L-02细胞内GSH含量无明显影响。FITC标记DR5抗体的FCM分析显示: API(5.0μmol/L、10μmol/L、20.0μmol/L)上调Hep G2细胞DR5表达,呈浓度依赖性(P<0.05);而在L-02细胞系中,无此作用。另外,添加外源性GSH(500μmol/L GSH预孵育1 h )能够有效拮抗API降低Hep G2细胞内GSH水平和上调DR5蛋白表达作用以及API和100 TRAIL合用抑制细胞活性、诱导细胞凋亡和caspase-3活化作用(P<0.05)。结论1.亚毒性浓度的API具有增强TRAIL诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡作用。2.亚毒性浓度的API与TRAIL合用对人胚肝L-02细胞凋亡影响小。3.细胞内GSH耗竭是亚毒性浓度的API敏化TRAIL诱导Hep G2细胞凋亡作用的主要机制之一。

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