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HIF-1a蛋白在急性白血病中的表达及其与p-AKT的相关性

作　者: 倪福春
导　师: 万鼎铭
学　校: 郑州大学
专　业: 血液内科
关键词: 急性白血病 HIF-1α p-AKT 流式细胞术
分类号: R733.71
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

背景与目的急性白血病是常见的造血系统肿瘤,其本质是造血干细胞的恶性克隆性疾病,特征为原始或幼稚细胞无限增殖,并存在分化障碍、凋亡受阻。在过去的30年,化疗和造血干细胞移植在一定程度上改善了白血病患者的预后。但由于细胞增殖失控、凋亡受抑的持续存在,导致相当的一部分白血病患者诱导缓解失败或者缓解后复发。肿瘤细胞增殖迅速导致耗氧量增加而处于缺氧环境,肿瘤细胞通过增加组织微血管密度(MVD)和改变代谢方式来适应缺氧环境,从而导致肿瘤细胞的恶性增殖和转移,白血病细胞恶性增殖和正常造血受抑使缺氧更加严重。缺氧诱导因子HIF-1(Hypoxia Inducible Factor-1)属于碱性螺旋-环-螺旋(basic-helix-loop-helix,bHLH)转录因子超家族中的PAS(per-ARNT sim,PAS)亚族蛋白。是调控肿瘤缺氧效应的一类极为重要的转录因子,被激活后可以调节下游多种基因。目前,被确定的基因已有100余种,其中四类目的基因的蛋白产物与肿瘤的关系密切,包括与血管生成相关的因子,葡萄糖转运与糖酵解酶,与肿瘤侵袭和转移相关的因子与肿瘤增殖和凋亡相关蛋白。激活下游的靶基因,从而促进肿瘤的生长。p-AKT在多种肿瘤组织中,如卵巢癌、前列腺癌、多发性骨髓瘤、乳腺癌、胰癌、肺癌及子宫内膜癌的组织中都有高表达及活化。AKT被磷酸化为有活性的p-AKT,从而激活PI3K/AKT/mTOR信号路径。进而诱导和活化HIF-1α,并增加HIF-1α的稳定性,调节下游的靶基因,参与了肿瘤的发生发展。HIF-1α在多种实体瘤中的作用已十分明确,而有关HIF-1α在血液系统疾病中的研究较少。陈震章等人用免疫组化方法检测急性白血病骨髓中HIF1-α的表达明显增高。目前有关HIF-1α在急性白血病中的表达情况及其与PI3K/AKT信号通路之间的关系尚未见报道。本课题拟应用流式细胞术检测HIF-1α、p-AKT蛋白在初治急性白血病骨髓单个核细胞中的表达情况。分析两者之间的相互关系以及与患者临床表现的相关性,进而探讨HIF-1α和p-AKT在急性白血病细胞的增殖和浸润中的可能作用。材料与方法:病例资料均来自郑州大学第一附属医院血液科2008年8月至2009年2月住院病人。研究对象分为三组:①初治白血病55例,男35例,女20例,中位年龄37岁(15-74)岁,其中急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)38例,急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)17例。②急性白血病完全缓解组(AL-CR)23例(AML-CR 14例,ALL-CR 9例),男13例,女10例。③对照组13名,男7名,女6名,为异基因骨髓移植供者或门诊非恶性血液病患者。急性白血病的诊断均符合张之南血液病诊断及疗效标准;AML患者给予标准DA(DNR+Ara-C)或TA(THP+Ara-C)方案治疗(M3以全反式维甲酸或全反式维甲酸加三氧化二砷方案治疗),ALL患者以VDCLP(VCR+DNR+CTX+L-ASP+Prcd)方案治疗。化疗1疗程后复查骨髓象判断是否完全缓解(CR)。CR的判断标准参考张之南血液病诊断及疗效标准。应用流式细胞术直接免疫荧光标记法检测细胞膜胞浆蛋白HIF-1α和胞浆蛋白p-AKT的表达,以幼稚细胞群中抗原表达细胞＞20%作为阳性。结果:1.HIF-1α在急性白血病中的表达HIF-1α在初治急性白血病中阳性表达率85.45%,均显著高于对照组和AL-CR组(P＜0.05)。HIF-1α在初治AML中阳性表达率为86.84%,初治ALL中阳性表达率为82.35%,均显著高于对照组(P＜0.05)。初治AML和ALL之间比较,AML-CR和ALL-CR之间,AL-CR与对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。2.p-AKT在急性白血病中的表达p-AKT在初治组急性白血病组中阳性表达率80.00%,均明显高于对照组和AL-CR组(P＜0.05),p-AKT在初治AML中阳性表达率为76.32%,初治ALL中阳性表达率为88.24%,均显著高于对照组(P＜0.05)。初治AML和ALL之间比较,AML-CR和ALL-CR之间,AL-CR与对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。3.HIF-1α与p-AKT的表达关联性分析所有55例AL患者中HIF-1α+/p-AKT+患者41例(74.55%),HIF-1α-/p-AKT-患者5例(9.09%),HIF-1α+/p-AKT-患者6(10.91%)例,HIF-1α-/p-AKT+患者3例(5.45%)。应用2×2列联表对HIF-1α和p-AKT在所有AML患者中的表达进行关联性分析发现,两者的表达具有关联性(χ~2=10.568,P=0.001);Pearson列联系数r=0.438(P=0.001)。4.HIF-1α和p-AKT表达水平与患者性别临床特征无明显相关性(P＞0.05),HIF-1α与p-AKT在白血病中的表达与髓外浸润相关(P＜0.05)。结论:1.HIF-1α与p-AKT在急性白血病中均呈高表达,无统计学差异。提示二者的异常高表达可能参与急性白血病的发生发展,且与白血病的类型无关。2.HIF-1α与p-AKT在白血病中的表达在且正相关性,说明二者在白血病的发生机制中具有协同作用。3.HIF-1α与p-AKT在白血病中的表达均与髓外浸润相关,可能与共同参与上调下游靶基因表达。

全文目录

中文摘要  3-6
Abstract  6-11
论文部分 HIF-1α蛋白在急性白血病中的表达及其与p-AKT的相关性  11-32
  前言  11-13
  材料与方法  13-17
  结果  17-26
  结论  26-27
  附图  27-28
  参考文献  28-32
综述部分 HIF-1α在肿瘤发生及治疗中的作用研究进展  32-55
  参考文献  47-55
附录部分  55-56
  英文缩略词索引  55-56
  致谢  56

HIF-1a蛋白在急性白血病中的表达及其与p-AKT的相关性

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